核酸鉴定方法之浓度
阅读：442发布时间：2021-11-10
核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得质量、纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要，因此，对纯化后的核酸进行鉴定也是的步骤。本文简单的回顾学习下核酸鉴定的方法。
核酸鉴定包括：浓度/纯度鉴定+完整性鉴定
1.浓度/纯度鉴定
（1）紫外分光光度计：
原理：由于核酸中的碱基都具有共轭双键，所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有条典型的吸收曲线，其吸收峰在260nm处，吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收峰在280nm处，所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之。
由于核苷酸大吸收波长为260nm,根据朗伯-比尔定律可计算出在波长260nm的紫外线下，1个OD值的光密度大约相当于50µg/ml的双链DNA， 40µg/ml的单链RNA。紫外分光光度法只适用于测定浓度大于0.25µg/ml的核酸溶液。
计算公式:
dsDNA（µg/µl）=OD260x50x稀释倍数/1000
RNA（µg/µl）=OD260x40x稀释倍数/1000
纯净的DNA OD260/OD280=1.8，制备的样品DNA比值在1.7-1.9，若洗脱时不使用洗脱缓冲液而使用去离子水，比值会偏低，因为PH值和离子存在会影响光的吸收值。
当OD260/OD280< 1.7，表明蛋白质含量较，可用利用酚、氯仿、异戊醇抽提，再用乙醇沉淀去除。
当OD260/OD280> 2.0，表明RNA含量较。可用RNaseA消化后再进行纯化。
OD260/OD230的值，般不小于2.0，若小于2.0，表明有碳水化合物、盐类或有机试剂污染。
