?同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱，可依其分子?差异分离；是一种广泛应用的partition色析法 （Pharmacia操作手册, Gel Filtration）。
仪器设备：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；分划收集器 （fraction collector, 需准备干净试管约100 支）；浓缩用离心机 （低速5,000 rpm）；浓缩用离心管Centriprep-30 （Amicon 4322） 请注意其使用方法
药品试剂：胶体Sephacryl S-300 （Pharmacia）：a. 预先以缓冲液buffer A-150 平衡好，并且使*??后的胶体体积，占全部体积的七至八成；要先预估好胶体的使用?。b. 胶体温?要与操作场所的温?一致，否则温?变化会产生气泡。c. Sephacryl 系?胶体有相当大的吸附?，因此要在缓冲液加入0.15 M 以上的NaCl 以除去非专一性吸附。Buffer A-150：注意使用时的温?要与管柱胶体的温?一致标准分子?组合 （Bio-Rad 151-1901）：溶于1 mL 后每组取0.4 mL。含有thyroglobulin （670 kD）, bovine gamma globulin （158 kD）, chicken ovalbumin （44 kD）, equine myoglobin （17 kD）, vitamin B12 （1,350）
方法步骤：
管柱装填：1） 以纯水冲洗玻璃管柱 （以纯水上下冲洗即可，严禁使用试管刷）；并请?解管柱的构造与拆装方法，垂直架好管柱，以软管连接分划收集器，并以bufferA-150 试看管?是否通畅；可以用*或长尾文书夹夹住出口软管，则可控制溶离的进?。 注意系统的摆设要适当，?要装置于交通要冲。2） 依预估?取出Sephacryl 胶体，注意胶体的温?与缓冲液是否已平衡；将瓶中的胶体上下震荡，使的*悬浮，但勿产生太多气泡。3） 在管柱内加入约10 cm 高缓冲液，然后将胶体慢慢沿着管壁倒入管柱，一直加到管柱顶端，开始?洗后胶体??很快。当胶体上方的液面逐渐?低时，可于顶端添加胶体，以达所要高?；胶体高?约90 cm。4） 胶体*??后，小心以buffer A-150 加满管柱，关闭出口，装上顶端端盖并连通缓冲液瓶，打开出口以重??洗。 调整缓冲液瓶高?，使?速约每五~?秒一滴，并设定收集体积为2.5 mL/tube。5） 胶柱?洗约100 mL 后，关闭出口，拆开顶端端盖，先以滴管吸出胶体上方的溶液到剩约1 cm 高，注意勿破坏胶体表面平整； 然后打开出口，使液面下?至胶体面，再关闭出口，准备注入样本。
样本色析进?：6） 以微?移液器或滴管吸取样本 （样本体积?得超过胶体总体积的3%），沿着胶体上方管壁缓慢加入，注意切勿破坏胶体的平整表面！（样本确实体积 _______ mL）7） 打开出口，同时开启分划收集器；当样本*没入胶体时，关闭出口，缓缓加入与样本相等体积的buffer A-150，打开出口待其慢慢进入胶体中，如此重复二次。?得扰动胶体表面，造成凹陷。8） 暂时关闭出口，将液面高?加满至管柱顶端，并把顶端端盖锁上；然后打开出口开始溶离，调整缓冲液瓶的高?，使?速为6 s 一滴。9） 要?心观察前面几个分划，确定整个系统运转无碍，小心分划收集器容?出问题。管柱预计将?洗过夜，收集约80 管。10） 收集分划试管，进?蛋白质定?分析以及GUS 活性测定，并请作图。11） 收集GUS 活性区，以Centriprep-30 浓缩至10 mL 后，加buffer A-0 稀释至20 mL，再次浓缩至 _______ mL （GF），保?100 μL。12） 管柱请再以buffer A-150 ?洗100 mL 后，小心放置一旁，准备以后进?分子?测定。
分子?测定：13） 进?分子?测定前一天，请先以buffer A-150 ?洗100 mL，并检查胶柱内有无气泡产生，?有严重的气泡或干?，必须重新装填管柱。14） 取标准分子?溶液0.4 mL，加上纯质目标酶0.5 mL （以亲和层析法所得的AF 部份），如上法注入管柱中，?刻开始进?胶体过滤，并收集各分划。请依循上述所有管柱及分划收集器的操作要点。15） 收集所得的各分划，进?蛋白质定?分析，可定出数个蛋白质尖峰，以作为分子?依据；另以目测法，决定红色高峰的管数，则可定出vitamin B12的溶离管数。?用以上数据，可画出分子?与溶离管数间的直线关系，作为分子?判定的标准校正线。16） 同样的一批分划，请进?酶活性分析 （GUS），则可定出酶的溶离体积，对照上述标准校正线，则可求出酶的分子?。
拆除管柱及保存胶体：17） ?管柱长期?用，应当自管柱中取出胶体，以缓冲液清洗后，置?藏室中保存，但?要放在?冻箱中。胶体?装填太紧，有时可能??取出，要有耐心地以缓冲液慢慢冲出?。18） 胶体可以加0.01% NaN3防止霉菌生长，但使用前记得要洗去；再?使用时，请检查胶体中有无灰黑色霉菌颗?，?有结块而??打散者，也?要使用。
