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用抗人抗体包被微珠

时间:2012/9/18阅读:507
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[器材和试剂]
● 磁珠(Dynabeads M-450,甲苯磺酰活化,Dynal)
● 硼酸盐缓冲液(50mmol/L硼酸钠,pH 9.5)
每 抗人Fc多克隆抗体(免疫纯的羊抗人IgG Fc片段特异性抗体,Pierce)
● 磁分离器(Dynal)
● PBS(磷酸盐缓冲液: 2mmol/L NaH2PO4 H20, 16mmol/L Na2HPO4·2H20, 15mmol/L NaCl)
● PBBS (PBS, 0.1%BSA)
● 硫柳汞(Sigma)
 
[方法]
1.将500ul已充分混悬的磁珠转移到1支Eppendorf管中。将该管置于磁分离仪中,除去液体。
2.将磁珠悬浮于1m1硼酸盐缓冲液中,混合,再如上除去上清液。
3.将磁珠悬浮在含有75ug抗人Fc特异性多克隆抗体的硼酸盐缓冲液中,定容到1m1;在转轮上,室温孵育24h。
4.用磁分离仪去除上清液,将磁珠转移到一个含10mlPBBS的Falcon管中。4℃旋转洗涤磁珠,10分钟1次,30分钟3次,过夜。每次洗涤后,将含有磁珠的试管插入合适的磁分离仪中除去上清。
5.已包被的磁珠储存在4℃(加0.05%的硫柳汞)。如果需长期储存(超过2周),使用前应将磁珠用10mlPBBS洗涤3遍(每次5分钟)。

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