ELISA试剂盒检测沙眼衣原体抗体的方法

沙眼衣原体有3个生物学变种，其中2个与人类疾病有关，引起沙眼及包涵体结膜炎。沙眼是世界范围流行的眼病，是致盲的重要原因。此外，沙眼衣原体、人型支原体、解脲脲原体是引起人类泌尿生殖系统感染的重要病原体，尤以沙眼衣原体更重要。常用检查方法有ELISA试剂盒和生物芯片法检测沙眼衣原体抗体。
方法学原理：在已包被沙眼衣原体抗原的微孔板孑L内，加入待测血清和HRP-抗人Ig，再加入酶底物显色。根据显色强度可判定沙眼衣原体抗体的有无及水平。
    [试剂]
    1．预包被微孔板
    2．洗涤液
    3．HRP-抗人IgG
    4．阴性对照、阳性对照
    5．底物液
    6．终止液
    [仪器]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
    [ELISA试剂盒检测步骤]
    1．从试剂盒中取出已包被沙眼衣原体抗原的微孔板和所有试剂，预温至室温。
    2．将待检血清、校准血清、阴性和阳性质控血清用稀释液作1：20稀释。分别加至相应的微孔内，每孔100u1。空白孔加稀释剂100ul。
    3．室温环境中温育20min后用洗涤液洗3次，每次洗涤量250ul。
    4．各孔分别加HRP-抗人IgGl00~1，室温环境中温育20min，同上法洗涤3次。
    5．各孔加底物溶液100rtl，室温环境中温育10min显色，每孔加终止液100gl终止反应。
    6．在酶联免疫测定仪上测定450nm波长的吸光度。
   [结果判断]
    1．将吸光度用下列公式换算成ISR值：
ISR＝样品的吸光度÷（校准物的平均吸光度×校正因子）
（校正因子在校准血清的标签上）
    2．待测血清ISR值≤0．9为阴性。
    3．待测血清ISR值为0．91一1. 09为可疑阳性，应重新检测或随诊。
    4．待测血清ISR值≥1．10为阳性。
    [注意事项]
    1．每次试验均须设置阳性与阴性质控血清和校准血清测定孔。
    2．用450nm波长，试剂空白的吸光度必须<0．15；阴性质控血清的吸光度必须<0．25；阳性质控血清的吸光度必须≥0．50；校准血清的吸光度必须≥0．25。
[ELISA试剂盒正常参考值]  沙眼衣原体抗体阴性。