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（1）的固相载体的选择：许多材料可作为固体载体，如聚氯乙烯，聚苯乙烯，聚丙酰胺和纤维素等。在凹孔板，形成管，珠等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管小鼠ELISA试剂盒何种载体，过滤之前，可以使用：抗原相同量的反应，在相同的实验条件下进行，以观察是否显色反应的均匀性，从而小鼠ELISA试剂盒确定吸附性能好。
（2）包被抗体（或抗原）的选择：抗体（或抗原）吸附在固相载体表面，纯度要求更好的吸附，值在9 ~ 9。6一般要求。吸附温度，时间和蛋白质的含量也有一定的影响，18～24小时4℃一般使用。蛋白涂层的*浓度为滴定法：采用不同的蛋白浓度（0。1，1和10μ／），在其他实验条件相同，阳性样品的值。选择蛋白含量zui少的值。对于大多数的蛋白质，通常1 ~ 10μ／。
（3）酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接法滴定。初始滴度（见酶标记抗体的一部分）。然后固定其他条件或采取“方法”（涂层的参考和酶标抗体，样品的不同稀释）准确滴定浓度在正式实验系统。
（4）酶的底物和氢供体的选择：氢供体的选择要求是廉价的，安全的，具有明显的显色反应，而本身无色。有些供氢体（如）有潜在的致癌作用，应注意保护。的条件下，应使用不致癌，氢供体灵敏度高，如和为氢供体是令人满意的。基板的影响，经过一段时间后，应加入强酸或强碱终止反应。通常底物反应时间，10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是22在使用前。
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