人抗胰岛素受体抗体 (AIRA) ELISA试剂盒的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
80 U/ml | （6号标准品） | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
40 U/ml | （5号标准品） | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
20 U/ml | （4号标准品） | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
10 U/ml | （3号标准品） | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
5.0 U/ml | （2号标准品） | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
2.5 U/ml | （1号标准品） | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
0 U/ml | （空白对照） | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
- 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
人抗胰岛素受体抗体 (AIRA) ELISA试剂盒操作步骤
- 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
- 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
- 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
- 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
- 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
- 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
- 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
- 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
- 在450nm波长处测定各孔的OD值。
