带你简单认识ELISA试剂盒

    ELISA试剂盒的组成：
    ELISA应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。主要有3类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。自然抗原的纯度不高，特异性不强；合成抗原一般为多肽片段，缺乏天然抗原所具有的立体结构表位，亲和力不高，可能导致相应表位的抗体漏检；基因重组抗原具有安全、特异性强、亲和力高、产量大等特点，是一种比较理想的抗原，但其纯化比较困难。
    在ELISA试剂盒中酶作用于底物后生成有色物质、荧光物质或导致化学发光，分别可用分光光度计、荧光光度计测量及照度计测量。荧光和化学发光测定的敏感度均高于比色测定，标准曲线的线性范围亦较比色反应宽，测定效果优于常用的比色ELISA。
    包被将免疫活性物质（抗原或抗体）结合于固相载体上的过程称为包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素-*间接包被法，特别是后一方法，效率高，酶联免疫检测试剂盒而且可用以包被不易吸附在固相上的各种免疫活性物质。具体做法是先将链霉亲和素包被在固相载体上，然后使与*化的抗原或抗体与之结合。由于亲和素与*之间的高亲和力，抗原或抗体即间接结合在亲和素包被的固相上。
    临床检验的ELISA主要几种类型：
    1 双抗体夹心法测抗原：
    双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法，操作步骤如下：
    1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
    2）加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。 洗涤除去其他未结合物质。 
    3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
    4）加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。
    2 双抗原夹心法测抗体 ：
    反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。
    3 间接法测抗体：
    间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗*抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。
    操作步骤如下： 
    1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。 
    2）加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
    3）加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
    4）加底物显色。本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
    ELISA试剂盒种类：
标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
种属：人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。