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免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些?上海沪鼎生物科技有限公司给您分析:
1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液,怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果?另外,不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索适当浓度。
2、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验,这是恰当的时间和次数。若不行,还可高压修复。
3、组织切片本身这种抗原含量低;
4、血清封闭时间过长。
5、DAB孵育时间过短。
6、细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。
7、开始做免疫组化,我建议你一定要首先做个阳性对照片,排除抗体等外的方法问题。
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