关于冷冻细胞活化

1.冷冻原则

冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。 

2.细胞活化后，约需数日，或继代一至二代。其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。

3.材料 ：

①37 oC 恒温水槽 

②新鲜培养基 

③无菌吸管/ 离心管/ 培养瓶 

④液氮或干冰容器 

4.操作步骤： 

①操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。 

②自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。 

③将新鲜培养基置于37 °C 水槽中回温，回温后喷以70 % 酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。 

④取出冷冻管，立即放入37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化，以70%ethanol 擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。 

⑤取出0.9 ml 解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10～1:15)，混合均匀，放入CO2 培养箱培养。另取0.1 ml 解冻细胞悬浮液作存活测试。 

⑥解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO 或glycerol)，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10 ml 培养基之离心管内，离心1,000 rpm, 5 分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2 培养箱培养。 

⑦若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。

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