掌握技巧,轻松完成ELISA试剂盒实验

ElISA试剂盒实验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。在ELISA试剂盒实验操作前，许多实验者会收集相关实验资料，真正用到的少之又少！上海沪鼎为您整理了以下内容，让您不再为ELISA实验烦恼，轻松完成ELISA试剂盒实验！

一、加样的经验总结

    加样或加试剂时，请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，*个孔与zui 后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间控制 在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。 

二、孵育的三条必知

    1.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标 板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；

    2.洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态；

    3.同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

三、ELISA洗涤小技巧

    洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直 接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响zui后的酶标仪读数。 

四、反应时间的控制

    加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔 10分钟），如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。 

五、操作说明 

    1.封板膜只做一次性使用。 

    2.标本中待测物质含量过高时先将样本稀释一定倍数后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。

    3.各步加样均使用加样器，并经常校对其正确性，一次加样时间控制在5分钟内（标本数目多的时候，上海恒远推荐使用排枪加样）。

    4.液体标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

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