沪鼎生物|鹅胰岛素(Insulin)ELISA试剂盒的原理和操作方法

检测原理：

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鹅胰岛素(Insulin)水平。用纯化的鹅胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过che底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鹅胰岛素(Insulin)浓度。

操作程序

1.准备试剂：准备样品和标准品。

2.加样：加入准备好的样品和标准品。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

8. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10-20分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项：

1.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

2.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

3.为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

4.要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。  

5.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

6.显色时间供参考，因用户实验室条件差异，最佳显色时间会有所不同。

7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8.本试剂不同批号组分不得混用。

9.揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。

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