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液相色谱-电喷雾质谱联用法分析罗汉果皂甙

阅读：777发布时间：2007-1-26

   摘要：【目的】建立罗汉果皂甙的HPLC/ESI/MS2 定性分析方法。【方法】采用液相色谱-电喷雾质谱联用法对罗汉果皂甙提取物进行分离分析。【结果】根据主要色谱峰的质谱特征，初步鉴定出罗汉果皂甙提取物中主要的皂甙成分为11-氧-罗汉果皂甙V（11-oxo-mogroside-V）、罗汉果皂甙V（mogroside-V）、罗汉果皂甙IV（mogroside-IV）、罗汉果皂甙VI（mogroside-VI）和赛门甙I（siamenoside-I）。【结论】对于罗汉果皂甙的分离及定性分析，液相色谱-电喷雾质谱(HPLC／ESI/MS2)联用分析法是一种方便快捷有效的方法。
    关键词：罗汉果(Siratia grosvenori)；罗汉果皂甙；液相色谱-电喷雾质谱联用法
    罗汉果是广西特产中药，研究表明，强甜味的非糖物质三萜类成分罗汉果皂甙（mogroside）是其主要成分[1,2]。罗汉果皂甙属*烷型化合物，种类较多，结构相似，迄今已从罗汉果果实中分离并鉴定出11 种葫芦烷三萜甙类（cucurbitane glycoside）化合物[3～5]。
    罗汉果皂甙的药理作用已有研究[6～9]，因此建立快速、准确的罗汉果皂甙分析鉴定新方法，对其生物活性的研究具有重要理论意义。若采用薄层色谱法或高压色谱法等传统方法分析检测罗汉果皂甙提取物中的罗汉果皂甙，需用标准样品进行定性分析，但罗汉果皂甙的标准样品目前尚无供应厂商，自行分离或合成标准样品则费时费力，因此给罗汉果皂甙的定性分析带来诸多不便。
    电喷雾（ESI）是一种软电离技术，能够有效地收集离子和提供大量的碎片信息，易于与液相色谱联用（HPLC/MS），这种联用技术具有分析速度快、分辨率高和灵敏度高的特点，并且具有对分析的样品进行快速定性的能力，已广泛应用于药物的检测和定性及其它领域。有关皂甙类化学成分的液质联用分析已有报道[10]，但对罗汉果中主要皂甙成分的液相分析及其电喷雾质谱研究尚未见报道。本文利用液相色谱-电喷雾-质谱／质谱联用的方法分离罗汉果皂甙提取物，并对其中的主要皂甙成分进行了定性分析，方法简便快速。

    罗汉果皂甙提取物的制备
    取500.00 g 罗汉果鲜果捣碎后用8 倍的水于80℃下提取3 次，每次1 h，过滤，收集滤液，于60℃下真空浓缩后调pH 9.0，然后上大孔树脂D101 柱，依次用蒸馏水、30%乙醇溶液、60%乙醇溶液进行洗脱，收集60%乙醇洗脱液后，经真空浓缩、冷冻干燥即得2.50 g 罗汉果皂甙提取物，经分光光度法分析[11,12]，该提取物的总皂甙
含量≥98%。

    HPLC/ESI/MS 分析
    样品溶液的配制：准确称取罗汉果皂甙提取物0.0100 g，用23%乙腈溶解并定容至10 ml。
    色谱条件：柱型：Hypersil ODS C18 柱（250 mm×4.6mm ID，5 μm）；流动相：乙腈∶水∶NH4Ac=23∶77∶0.05；柱温：30℃；流速：0.3 ml·min-1；进样量：1.0 μl。
    质谱条件：ESI 离子源电离，喷射电压：5 000 V；毛细管温度：250℃；喷射压力：25.0 PSI；干燥气流速：8.0 L·min-1；干燥气温度：250℃；扫描质量范围：100～1700 amu。负离子模式。

    ESI/MS2 分析
    ESI 离子源电离，喷射电压：3 500V；毛细管温度：250℃；喷射压力：20.0 PSI；干燥气流速：8.0 L·min-1；干燥气温度：350℃；扫描质量范围：100～1700 amu。负离子模式。

参考文献略

文章摘自:《中国新药与临床杂志》2005年7月,第24卷，第7期
作者：刘世坤, 裴奇,李佐军,周于禄,李兵


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