劲马教您如何用竞争法判断实验结果

  在竞争法ELISA中，阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争抑制物的量，一般调节阴性对照的吸光度在 1.0-1.5 之间，此时反应zui为敏感。竞争法 ELISA 不易用自视判断结果，因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异，一般均用比色计测定，读出S、P 和N 的吸光值。计算方法主要也有两种，即阳性判定值法和抑制率法。
a. 阳性判定值法
与间接法和夹心法中的阳性判定值法基本相同，但在计算公式中引入阳性对照 A 值，现举某种检测抗HBc 的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照为不含抗HBc 的复钙人血浆，阳性对照中抗HBc 含量为125±100u/ml。每次试验设2 个阳性对照和3 个阴性对照。测得A 值后，先计算阴性对照A 值的平均值(NC X )和阳性对照A 值的平均数(PCX)，两个平均数的差(N-P)必须大于一个特定的数值(例如0.300),试验才有效。3 个阴性对照 A 值均应小于2.000，而且应≥0.5×NCX 并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而以另2 个阴性对照重新计算×NCX；如有2 个阴性对照A 超出以上范围，则该次实验无效。阳性
判定值按下式计算：
阴性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX
标本 A 值≤阳性判定值的反应为阳性，A＞阳性判定值的反应为阴性。
b. 抑制率法
抑制率表示标本在竞争结合中标本对阴性反应显色的抑制程度，按下式计算：
抑制率(%)= (阴性对照A 值-标本A 值)×/阴性对照A 值一般规定抑制率≥50%为阳性，＜50%为阴性。