ELISA试剂盒的操作步骤进行测定

   ELISA试剂盒中一般有二次抗原抗体反应，即加标本后和加结合物后，此时反应的温度和时间应按规定的要求，保温容器是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA试剂盒板不应叠在一起。为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒应该是金属的，传热容易。如用保温箱，空湿盒应预先放在其中，以平衡温度，这在室温较低时更为重要。加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求，如室温高于20℃。

  ELISA试剂盒板可避光放在实验台上，以便不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应ELISA试剂盒测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA试剂盒，然后比较结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别zui大，这种载体就是这一ELISA试剂盒测定项目的zui合适的固相载体。

   ELISA试剂盒板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA试剂盒板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA试剂盒板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。ELISA试剂盒板的洗涤一般可采用以下方法：①吸干孔内反应液;②将洗涤液注满板孔;③放置2min，略作摇动;④吸干孔内液，也可倾去液体后在吸水纸上拍干。洗涤的次数一般为3～4次，有时甚至需洗5～6次。