上海晶抗生物工程有限公司
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阅读：144发布时间：2017-8-8
ELISA试剂盒操作步骤
1. 加样：规范品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，参加50微升不同浓度的规范品，空白孔设定1个孔参加50微升蒸馏水（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相同）、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终究稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。
2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗刷液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
4. 洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5. 加酶：每孔参加酶标试剂50μl，空白孔在外。
6. 温育：操作同2。
7. 洗刷：操作同4。
8. 显色：每孔先参加显色剂A50μl，再参加显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色15分钟.
9. 停止：每孔加停止液50μl，停止反响（此刻蓝色立转黄色）。
10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。
ELISA试剂盒注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗刷液可能会有结晶分出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。
3． 各步加样均应运用加样器，并常常校正其准确性，以避免试验误差。一次加样时刻控制在5分钟内，如标本数量多，*运用排枪加样。
4． 请每次测定的一起做规范曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于规范品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，核算时请zui终乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性运用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格依照说明书的操作进行，试验成果断定有必要以酶标仪读数为准.
8． 一切样品，洗刷液和各种废弃物都应按感染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
ELISA试剂盒核算：
以规范物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出规范曲线，依据样品的OD值由规范曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用规范物的浓度与OD值核算出规范曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，核算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实践浓度。
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