蜥蜴17羟孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒​使用方法

蜥蜴17羟孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒使用方法:

测定法的灵敏度来自作为报告的酶。酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。   24μg/ml    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

12μg/ml    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

6μg/ml     3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

3μg/ml     2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

1.5μg/ml   1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

细菌冻存液50ml

pUCm-T载体20次

pGL6(报告基因质粒)1μg

pGL6-TA(报告基因质粒)1μg

pGL6-miR(报告基因质粒)1μg

pAP1-luc(报告基因质粒)1μg

pAP1-TA-luc(报告基因质粒)1μg

pARE-luc(报告基因质粒)1μg

pGRE-luc(报告基因质粒)1μg

pISRE-TA-luc(报告基因质粒)1μg

pMyc-TA-luc(报告基因质粒)1μg

pNFκB-luc(报告基因质粒)1μg

pNFκB-TA-luc(报告基因质粒)1μg

pp53-TA-luc(报告基因质粒)1μg

pRb-TA-luc(报告基因质粒)1μg

pSTAT3-TA-luc(报告基因质粒)1μg

pAAT-promoter-luc(报告基因质粒)1μg

pIL-6-promoter-luc(报告基因质粒)1μg

pTNF-α-promoter-luc(报告基因质粒)1μg

pTNF-α-promoter-TA-luc(报告基因质粒)1μg

pCMV-Blank1μg

pCMV-C-BFP(蓝色荧光蛋白)1μg

pCMV-C-CFP(青色荧光蛋白)1μg

pCMV-C-DsRed(红色荧光蛋白)1μg