恶性多发性畸胎瘤细胞；NTERA-2培养操作步骤

恶性多发性畸胎瘤细胞；NTERA-2培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

6．快速固定步骤需谨慎操作，以避免细胞形态的改变或抗原的损失。将取出的盖玻片置于含有4%多聚甲醛的固定液中，室温下固定10-15分钟。固定时间不宜过长，以防细胞结构过度硬化。

7．固定完成后，用PBS（磷酸盐缓冲液）漂洗盖玻片3次，每次5分钟，以去除残留的固定液。此步骤对于后续的免疫染色至关重要，能有效减少背景噪音。

8．接下来进行通透化处理，使用0.1% Triton X-100溶液处理盖玻片10分钟，使细胞膜通透性增加，便于抗体进入细胞内与抗原结合。

9．通透后，再次用PBS漂洗3次，随后进行封闭处理，用含5%胎牛血清的PBS封闭液覆盖盖玻片，室温孵育30分钟，以减少非特异性抗体结合。

10．最后，根据实验需求选择合适的特异性抗体进行免疫染色，并按照抗体说明书推荐的步骤进行孵育、洗涤、显色等操作，直至完成整个免疫细胞化学检测流程。通过显微镜观察染色结果，分析恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA-2的形态学特征及相关蛋白表达情况。