猴补体（C4）elisa试剂盒说明书

猴补体（C4）elisa试剂盒说明书

操作步骤 
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。 
480µg/ml 5号标准品 150µl 的原倍标准品加入150µl标准品稀释液 
240µg/ml 4号标准品 150µl 的5号标准品加入150µl标准品稀释液 
120µg/ml 3号标准品 150µl 的4号标准品加入150µl标准品稀释液 
60µg/ml 2号标准品 150µl 的3号标准品加入150µl标准品稀释液 
30µg/ml 1号标准品 150µl 的2号标准品加入150µl标准品稀释液 
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
然后再加待测样品10µl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。 
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。 
7. 温育：操作同3。 
8. 洗涤：操作同5。 
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟. 
10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。