鱼CD4分子（CD4）elisa试剂盒操作方法

鱼CD4分子(CD4)elisa试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
48U/ml  5 号标准品  150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
24U/ml  4 号标准品  150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
12U/ml  3 号标准品  150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
6.0U/ml  2 号标准品  150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
3.0U/ml  1 号标准品  150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl， 待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品 10µl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.  温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.  配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.  温育：操作同 3。
8.  洗涤：操作同 5。
9.  显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 鱼CD4分子(CD4)elisa试剂盒测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。