鸭子白细胞介素4（IL-4）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

鸭子白细胞介素4（IL-4）酶联免疫分析试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸭子白细胞介素4（IL-4）水平。用纯化的鸭子
白细胞介素4（IL-4）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细
胞介素4（IL-4），再与HRP标记的白细胞介素4（IL-4）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗
体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在
酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素4（IL-4）呈正相关。用
酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸭子白细胞介素4
（IL-4）浓度。
鸭子白细胞介素4（IL-4）酶联免疫分析试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（640pg/ml）0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
鸭子白细胞介素4（IL-4）酶联免疫分析试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
320pg/ml5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
160pg/ml4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液
80pg/ml3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液
40pg/ml2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液
20pg/ml1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
然后再加待测样品10µl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：鸭子白细胞介素4（IL-4）酶联免疫分析试剂盒以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。