大鼠16α羟基雌酮1（16-α OHE-1）试剂盒使用说明书

大鼠16α羟基雌酮1（16-α OHE-1）试剂盒实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)水平。用纯化的大鼠16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)，再与HRP标记的16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)浓度。 

试剂盒组成 

1
 30倍浓缩洗涤液
 20ml×1瓶
 7
 终止液
 6ml×1瓶
 
2
 酶标试剂
 6ml×1瓶
 8
 标准品（1200 ng/L）
 0.5ml×1瓶
 
3
 酶标包被板
 12孔×8条
 9
 标准品稀释液
 1.5ml×1瓶
 
4
 样品稀释液
 6ml×1瓶
 10
 说明书
 1份
 
5
 显色剂A液
 6ml×1瓶
 11
 封板膜
 2张  
 
6
 显色剂B液
 6ml×1/瓶
 12
 密封袋
 1个
 

标本要求 

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

大鼠16α羟基雌酮1（16-α OHE-1）试剂盒操作步骤

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
600ng/L
 5号标准品
 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
 
300ng/L
 4号标准品
 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
 
150ng/L
 3号标准品
 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
 
75ng/L
 2号标准品
 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
 
37.5ng/L
 1号标准品
 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
 

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行大鼠16α羟基雌酮1（16-α OHE-1）试剂盒。