植物膜蛋白酶联免疫分析ELISA试剂盒使用方法

植物膜蛋白酶联免疫分析ELISA试剂盒实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中植物膜蛋白水平。用纯化的植物膜蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的植物膜蛋白标准品和未知浓度的植物膜蛋白待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物膜蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物膜蛋白浓度。

试剂盒组成

1

20倍浓缩洗涤液

50ml×1瓶

9

标准品S1（60μg/L）

0.5ml×1瓶

2

链霉亲和素-HRP

6ml×1瓶

标准品S2（40μg/L）

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

标准品S3（20μg/L ）

0.5ml×1瓶

4

生物素标记的抗-IgG抗体

6ml×1瓶

标准品S4（10μg/L ）

0.5ml×1瓶

5

显色剂A液

6ml×1瓶

标准品S5（5μg/L ）

0.5ml×1瓶 

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

10

密封袋

1个

7

终止液

6ml×1瓶

11

封板膜

3张

8

样品稀释液

6ml×1瓶

12

说明书

1份

植物膜蛋白酶联免疫分析ELISA试剂盒标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

2.       加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl（样品终稀释度为5倍），盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

3.       配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4.       洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。

5.       加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟

6.       洗涤：操作同4。

7.       加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

8.       洗涤：操作同4。

9.       显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.   终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.   测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．  如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以稀释倍数（×5×n）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

线形范围：

2μg/L -70μg/L

规格：

96人份/盒

植物膜蛋白酶联免疫分析ELISA试剂盒保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月