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选择ELISA试剂盒应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
产品名称:猪伪狂犬病毒(PRV)抗体(IgG)elisa试剂盒
英文名称:Pig pseudorabies virusPRVantibodyIgGELISA kit
规格:48T/96T
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
血红蛋白γ1(HBγ1)(酶联免疫吸附试验法) KitforHemoglobinGamma1(HBg1)
无翅型MMTV整合位点家族成员9B(WNT9B)(酶联免疫吸附试验法) KitforWinglessTypeMMTVIntegionSiteFamily,Member9B(WNT9B)
亲环素A(CYPA)(酶联免疫吸附试验法) KitforCyclophilinA(CYPA)
表皮生长因子受体2(EGFR2)(酶联免疫吸附试验法) KitforEpidermalGrowthFactorReceptor2(EGFR2)
脂肪酸转移酶2(LIPT2)(酶联免疫吸附试验法) KitforLipoyltransferase2(LIPT2)
5-羟色胺受体2C(HTR2C)(酶联免疫吸附试验法) Kitfor5-HydroxytryptamineReceptor2C(HTR2C)
细胞色素P450家族成员1A1(CYP1A1)(酶联免疫吸附试验法) KitforCytochromeP4501A1(CYP1A1)
鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)(酶联免疫吸附试验法) KitforSquamousCellCarcinomaAntigen1(SCCA1)
白三烯B4(LTB4)(酶联免疫吸附试验法) KitforLeukotrieneB4(LTB4)
白介素1受体辅助蛋白(IL1RAP)(酶联免疫吸附试验法) KitforInterleukin1ReceptorAccessoryProtein(IL1RAP)
整合素αM(ITGαM)(酶联免疫吸附试验法)
整合素αV(ITGαV)(酶联免疫吸附试验法)
整合素β1(ITGβ1)(酶联免疫吸附试验法)
整合素β2(ITGβ2)(酶联免疫吸附试验法)
整合素β3(ITGβ3)(酶联免疫吸附试验法)
整合素β3(ITGβ3)(酶联免疫吸附试验法)
猪伪狂犬病毒(PRV)抗体(IgG)elisa试剂盒β-galactosidaseβ半乳糖苷酶种属: Massilia│timonae蒂莫医院马赛菌
Beta-Endorphinβ-内啡肽种属: Theileria│equi马泰勒虫(青海刚察株)
Interferon γγ干扰素种属: Colletotrichum│arecae槟榔炭疽菌
γ-glutamyl transpeptidaseγ-谷氨酰转肽酶种属: Circinella│angarensis安地卷霉
Interleukin-2 receptor白介素2受体种属: Thermotoga│lettingae莱廷格热袍菌
Leukotriene B4白三烯B4种属: Microtetraspora│glauca青色小四孢菌
Interleukin 1白细胞介素1种属: Dactylaria│sp.梨形指环菌
Interleukin 10白细胞介素10种属: Bacillus│thuringiensis subsp. finitimus苏云金杆菌幕虫亚种
Interleukin 17白细胞介素17种属: Halomonas│canadensis加拿大盐单胞菌
Interleukin 18白细胞介素18种属: Aequorivita│sp.栖海面菌
Interleukin 1β白细胞介素1β种属: Cordyceps│sp.冬虫夏草属
Interleukin 1 receptor antagonist白细胞介素1受体拮抗剂种属: Septoria│lycopersici Speg.番茄白星病菌
Interleukin 2白细胞介素2种属: Bacillus│amyloliquefaciens subsp. plantarum淀粉液化芽孢杆菌
Interleukin 23白细胞介素23种属: Theileria│annulata环形泰勒虫
Interleukin 4白细胞介素4种属: Marasmius│haematocephalus (Mont.) Fr.紫红小皮伞
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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