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具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
产品名称:鸭环磷酸鸟苷(cGMP)elisa试剂盒
英文名称:Duck cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit
规格:48T/96T
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
选择ELISA试剂盒应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
十二(标准品)HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb二甲酰硫素
二(DEA)(标准品)Liprin β1 AntibodyN-甲酰基-2--5-三氟
2,二硝基标准溶液(1.00mg/ml,基体:甲)Ghost Dye™ Red 780 Viability DyeMETHOXY-2-(TRIFLUOROMETHYL)PHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR
标准溶液(100μg/ml,溶剂:甲)TRAF4 (D1N3A) Rabbit mAb反式-基-1-基-酸
2,二甲(标准品)Syntaxin 1A (D4E2W) Rabbit mAb2-[(酰硫)甲基]-基酸
2,5-二甲(标准品)Flotillin-1 (D2V7J) XP® Rabbit mAb(R)-(-)-alpha-甲氧基
3,二(标准品)Flotillin-1 (D2V7J) XP® Rabbit mAb2,5-二氟磺酰
3,二联(标准品)Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)羟基-2-萘甲酸甲酯
直接蓝6(标准品)ALDH2 AntibodyFLUORO-5-METHOXYBIPHENYL-CARBOXYLIC ACID
分散橙37(标准品)Smac/Diablo (D5S3R) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)6--5-甲基吡啶-酸
邻二甲酸二酯(标准品)MAVS (D5A9E) Rabbit mAb (PE Conjuga)1-溴-2-甲基萘
二甲基二化锡(标准品)ULK1 (D8H5) Rabbit mAb (Biotinylad)(2-溴-氧基)四氢-2H-吡喃
二基锡(标准品)VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)硒脲
甲基内吸(标准品)T2 (D6B9Y) Rabbit mAb6-(CYCLOPROPYLAMINO)-5-NITROQUINOLINE
2,4'-滴滴涕(标准品)PKM1 (D30G6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)5-甲氧基黄酮
2,4′-DDT标准溶液(100μg/mL,基体:异辛烷)PSD93 (D4Z4D) Rabbit mAb(氟-甲氧基基)三氟酸
4,4'-滴滴涕(标准品)DMAP1 (D4O2G) Rabbit mAb(R)-(+)-2-酸甲酯
溴菊酯(标准品)SimpleChIP® Human DMD Intron 2 Primers2-吡啶酸甲酯
鸭环磷酸鸟苷(cGMP)elisa试剂盒4-叔丁基甲 97%抗体植物蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量检测试剂盒O-(*基硅)羟胺 96%细叶远志皂苷叔丁基 Standard for GC, ≥99.5% (GC)鸡支原体抗体植物蛋白巯基/结合巯基含量荧光定量检测试剂盒反式-3-(*基硅基) 97%仙人掌叔丁基 CP,98%线粒体转录因子1抗体植物淀粉酶(AMYLASE)总活性荧光定量检测试剂盒3-*基硅氧基-1-炔 97%盐酸咪达普利叔丁基 99%有丝分裂抑制缺陷蛋白1抗体植物多胺氧化酶(PAO)活性比色法定量检测试剂盒*基硅乙酸酯 98%L-丝氨酸叔丁基 分析标准品, ≥99.5% (GC)膜相关环指蛋白10抗体植物多酚氧化酶(polyphenol oxidase;PPO)活性比色法定量检测试剂盒2-*硅基吡啶 97%N-乙酰-L-半胱氨酸4-甲基-2-基戊酸钙 98%粘膜相关淋巴组织淋巴瘤转运蛋白1抗体植物二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量检测试剂盒4-(*基硅基)吗啉 97%L-甘-甘-缬三肽亚氨基二乙酸二乙酯 98%粘膜血管定居因子抗体植物二氧化碳(CO2)浓度酶偶联反应比色法定量检测试剂盒3-*基硅乙炔基吡啶 97%马尿酸-L-丙氨酸1,1-二-2-基环烷 97%抑癌基因抗体植物非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒(*硅烷基)乙酸 98%2′-脱氧鸟苷-5′-三磷酸三钠盐
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