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货号 | GOY-01X1268 |
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公司细胞现货供应,质量有保证、*、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称 | 大鼠真皮微血管内皮细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X1268 |
商品介绍:
名称 大鼠真皮微血管内皮细胞 2.组织来源:皮肤组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 大鼠真皮微血管内皮细胞分离自真皮组织;真皮,位于表皮深层,向下与皮下组织相连,真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起,埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维,使皮肤既有弹性,又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。微血管内皮细胞(MEC)在炎症反应、肿瘤生长、创面愈合过程中起着非常重要的作用。在创面愈合研究领域,由于表皮细胞、真皮成纤维细胞体外培养技术的成熟,人们对这两种细胞早已进行了大量深入的研究。与之相比,对参与创面愈合过程的另一种主要细胞——真皮微血管内皮细胞,则因其体外分离培养技术的困难而使相关的研究受限。 5.方法简介: ()实验室分离的大鼠真皮微血管内皮细胞采用胶原酶-中性混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的大鼠真皮微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 包被条件PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%) 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-R196 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态内皮细胞样 传代特性可传2-3代 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入*培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的*培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞*贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
50T 马疱疹病毒1型PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
5mL 乳腺上皮细胞生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
250mL Antigen Retrieval Reagent,5X Antigen Retrieval Reagent,5X 常温保存
50次 DNA电泳分子量标准(250-15000bp) DNAMETER 4℃保存
2 ug pGET-4T-2 pGET-4T-2 低温运输,-20℃保存
肉汤培养基I Broth medium 얾嵌쐛L⪀
大鼠真皮微血管内皮细胞含225ml LB1肉汤均质袋 英文名称:LB1 Broth 产品规格:10个/包 猪色素上皮衍生因子(PEDF)免疫试剂盒*直销
萘啶酮酸(5.0mg) 英文名称:Nalidixic Acid 产品规格:5.0mg/支*5 猪三碘甲状腺原(T3)免疫试剂盒进口、组装
含225ml FB1增菌液均质袋 英文名称:FB1 Broth 产品规格:10个/包 猪乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)免疫试剂盒进口、分装
FB1(Half-Fraser)添加剂(A、B) 英文名称:FB1 additive(A、B) 产品规格:2ml/支*40 猪乳酸脱氢(LDH)免疫试剂盒现货供应
含225mlGN增菌液均质袋 英文名称:GN Enrichment Broth 产品规格:10个/包 猪热休克蛋白70kDa蛋白1A(HSPA1A)免疫试剂盒*直销
含100ml GN增菌液均质袋 英文名称:GN Enrichment Broth 产品规格:10个/包 猪热休克蛋白70(HSP-70)免疫试剂盒进口、组装
含225ml志贺氏菌増菌肉汤均质袋 英文名称:Shigella Enrichment Broth 产品规格:10个/包 猪热休克蛋白60,线粒体(HSPD1/Hsp-60)免疫试剂盒进口、分装
含225ml7.5%氯化钠肉汤均质袋 英文名称:7.5% NaCl Broth 产品规格:10个/包 猪热休克蛋白40(HSP-40)免疫试剂盒现货供应
含50ml 7.5%氯化钠肉汤均质袋 英文名称:7.5% NaCl Broth 产品规格:10个/包 猪去乙酰化饥饿激素(dGHRL)免疫试剂盒*直销
含225ml10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤均质袋 英文名称:10% NaCl Trypticase Soy Broth 产品规格:10个/包 猪去素(NE)免疫试剂盒进口、组装
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