淀粉磷酸化酶（SP)紫外分光光度法 返回列表页

选择抗凝的注意点：

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

商品属性：

商品介绍：

测定意义

淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代谢过程的可逆反应酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。

在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于质体中，负责延长淀粉的 α-1,4-葡萄糖链的非还原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于细胞质基质中，催化淀粉中的α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸，负责葡萄糖链的磷酸解，是淀粉代谢过程中的关键酶。

在植物体中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物无机磷浓度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸浓度几乎高了两个数量级，一般认为淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要测定意义。

测定原理：

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸，并在6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原NADP+产生NADPH，使340nm下吸光值增加。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

实验方法学：

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.        每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.       依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。

罗丹明B ≥99.0% (HPLC) 氟离子（F-）标准溶液 1000mg/L，基体:水Anti-Phospho-Ack1(Tyr857/858) /FITC  荧光素标记兔抗人、小鼠化Ack1抗体IgG

罗丹明B 分析标准品，>99.0% (HPLC) 金标准溶液 1000μg/mlAnti-Phospho-Ack1(Tyr326) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化Ack1抗体IgG

过氧化钠 ACS reagent, ≥93.0%金标准溶液100.0μg/g，基体:0.5mol/l盐酸Anti-ACTH 1-39/FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠ACTH抗体IgG

过氧化钠 95%金标准溶液 100μg/mlAnti-ACTH(7-23)/FITC  荧光素标记促皮质(7-23)抗体IgG

银 AR镓标准溶液 1000μg/mlACTH(18-39)/FITC  荧光素标记ACTH（18-39）抗体IgG

磺基AR,99%锗标准溶液 1000μg/mlAnti-Actin Alpha /Alpha-SMA/FITC  荧光素标记Actin α 蛋白抗体IgG

磺基 CP,98%钆标准溶液 1000μg/mlAnti-Actin Alpha / Alpha-SMA/RBITC  红色荧光素标记肌动蛋白α抗体IgG

邻苯二甲酸氢钠 AR,99.8%钆标准溶液 1000µg/mL，基体：10%HClAnti- Beta-Actin/FITC  荧光素标记β-肌动蛋白抗体IgG

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