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选择ELISA试剂盒应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
产品名称:IL-9 elisa试剂盒厂家
英文名称:IL-9 elisa Kit
规格:48T/96T
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
细胞S6 KINASE激酶活性定量(A/B/C) CLK4 (Dual specificity protein kinase CLK4) 20 ul
组织S6 KINASE激酶活性定量(A/B/C) CTCF (Transcriptional repressor CTCF) 100 ul
细胞SGK1激酶活性定量(A/B/C) CD2BP2 (CD2 antigen cytoplasmic tail-binding protein 2) 20 ul
组织SGK1激酶活性定量(A/B/C) CD300E (CMRF35-like molecule 2) 100 ul
细胞SPRK1激酶活性定量(A/B/C) CD83(CD83 antigen) 100 ul
组织SPRK1激酶活性定量(A/B/C) CD99L2 (CD99 antigen-like protein 2) 100 ul
细胞TAK1-TAB1激酶活性定量(A/B/C) S4 (Cas scaffolding protein family member 4) 100 ul
组织TAK1-TAB1激酶活性定量(A/B/C) CLK4 (Dual specificity protein kinase CLK4) 100 ul
细胞WEE1激酶活性定量(A/B/C) CABLES1 (CDK5 and ABL1 enzyme substrate 1) 20 ul
组织WEE1激酶活性定量(A/B/C) CDIPT (CDP-diacylglycerol–inositol 3-phosphatidyltransferase) 300 ul
细胞ABL1激酶活性定量(A/B/C) KIN1 (Caskin-1) 100 ul
组织ABL1激酶活性定量(A/B/C) CMYA5 (Cardiomyopathy-associated protein 5) 100 ul
细胞ARG/ABL2激酶活性定量(A/B/C) CRTAC1 (Cartilage acidic protein 1) 100 ul
组织ARG/ABL2激酶活性定量(A/B/C) NCAM2(Neural cell adhesion molecule 2) 20 ul
细胞AX1激酶活性定量(A/B/C) CABS1 (Calcium-binding and spermatid-specific protein 1) 100 ul
组织AX1激酶活性定量(A/B/C) MICU1(Calcium uptake protein 1, mitochondrial) 100 ul
IL-9 elisa试剂盒厂家glutathione S-transferase Mu1谷胱甘肽S转移酶Mu1种属: Salmonella│manchester曼彻斯特沙门氏菌
Glutathione peroxidase谷胱甘肽过氧化酶种属: Actinobacillus│pleuropneumoniae胸膜肺炎嗜血杆菌
glutathione S-transferases谷胱甘肽巯基转移酶种属: Lyophyllum│ulmarium大榆蘑
Osteoprotegerin骨保护素种属: Serratia│marcescens褪色沙雷氏菌退色亚种(粘质沙雷氏菌, 粘质塞氏杆菌, 淡化沙雷氏菌)
Bone morphogenetic protein 2骨成型蛋白2种属: Athelia│rolfsii (Curzi) C.C. Tu & Kimbr.花生白绢病菌
Bone morphogenetic protein 4骨成型蛋白4种属: Agaricus│bisporus (J.E. Lange) Imbach大棕菇
Bone morphogenetic protein 6骨成型蛋白6种属: streptococcus│scarlatinae猩红热链球菌
Bone morphogenetic protein 7骨成型蛋白7种属: Lentinula│edodes (Berk.) Pegler香菇13
Bone gla protein;Osteocalcin骨钙素种属: Arthrobacter│kerguelensis凯尔盖朗群岛节杆菌
bone alkaline phosphatase骨碱性磷酸酶种属: Russula│ochroleuca (Pers.) Fr.蜜黄菌
Osteopontin骨桥素种属: Dietzia│maris海迪茨式菌
Bone-specific Alkphase B骨特异性碱性磷酸酶B种属: Flexibacter│chinensis中国屈挠杆菌
Bone morphogenetic proteins骨成型蛋白种属: Bacillus│thuringiensis subsp. higo苏云金芽孢杆菌黑克亚种
Catalase过氧化氢酶种属: Escherichia│coli大肠埃希氏菌DH5a/phA3G(1-104)-mA3(113-381)
peroxisome proliferators activator receptors alpha过氧化物酶体增殖物激活受体α种属: Rhizobium│sp. (Abrus mollis)毛相思根瘤菌
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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