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微生物菌种的培养：

⒈ 孢子制备

⑴ 孢子的制备

一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1％，氮源不超过0.5％)，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。面的培养温度大多数为28 ℃，少数为37 ℃，培养时间为5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制备　

霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25～28 ℃，培养时间为4～14天。

⒉ 种子制备

⑴ 摇瓶种子制备　

摇瓶种子进罐，常采用母瓶、子瓶两级培养，有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和*，并易被菌体分解利用，氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓，子瓶培养基浓度比母瓶略高，更接近种子罐的培养基配方。

⑵ 种子罐种子制备　

种子罐种子制备的工艺过程，因菌种不同而异，一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中，经培养后形成大量的菌丝，这样的种子称为一级种子，把一级种子转入发酵罐内发酵，称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内，经过培养形成更多的菌丝，这样制备的种子称为二级种子，将二级种子转入发酵罐内发酵，称为三级发酵。同样道理，使用三级种子的发酵，称为四级发酵。

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菌种的培养：

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

保存方法：

传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙 [3] 。

液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

悬液保存法：

① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。

常用的冷冻保存法：

① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是适用范围*的微生物保存法。

3-吡乙酸盐酸盐 99%酸桂酯  97%CD62L (ELAM-1/L-Selectin )  L选择素抗原

3,4,5-氧基苯乙 97%反式-2,4-癸二烯 >90.0%(GC)E-Selectin  E选择素抗原

1,2,3,4-四氢-1-萘  98%3,4-二甲氧基苯甲 ≥98%, FGCD80/B7-1(human)  人激分子B7-1蛋白抗原

3,4,5-氧基 98%乙酸癸酯  98%CD80/B7-1  激分子B7-1蛋白抗原

二硫代二乙酯 90%反式-2,4-癸二烯 FGCD82/KAI1 peptide  肿瘤转移抑制蛋白1抗原

聚四氟乙烯膜 0.03*300（mm）反式-2-癸烯 95%CD86/B7-2  CD86抗原

三噁烷   >99.5% (GC)反式-2-癸烯 ≥95%, FCCCdc2/P34CDC2/CDK1(Cell division control protein 2)  周期素依赖激1抗原

三恶烷 CP3-羟基丁酸乙酯  97%,FGCD339/Jagged1  CD339/Jagged1抗原

食酸菌广泛PH试纸(pH1-14) 1-14，显色反应间隔1RAS癌因相关蛋白RAB7抗体

广泛PH试纸(pH1-4) 1-4，显色反应间隔0.5 80条/盒c-Myc应答蛋白抗体

广泛PH试纸(pH1-10) 1-10，显色反应间隔0.5 80条/盒RAS癌因相关蛋白RAB6B抗体

广泛PH试纸(pH1-12) 1-12，显色反应间隔1

80条/盒Rab蛋白GTP激活蛋白1抗体

广泛PH试纸(pH4-10) 4-10，显色反应间隔1 80条/盒结肠癌相关因蛋白抗体（resistin-like β）

广泛PH试纸(pH9-14) 9-14 80条/盒化原癌因c-Met相关酪氨激抗体

醋铅试纸 80条/盒,10盒/箱环指蛋白6抗体

醋铅试纸 100条/盒核糖核6抗体

蓝石蕊试纸 pH值变色范围：8.0(蓝色)～4.5(红色)化Ras特异性核苷释放因子1

红石蕊试纸 pH值变色范围：4.5(红色)～8.0(蓝色)化周期检查控制蛋白质抗体

橙试纸 SZ化周期检查控制蛋白质抗体

中性石蕊试纸 PH范围8.0-5.0化周期检查控制蛋白质抗体

试纸 pH变色范围：8.2(无色)～10.0(红色)化原癌因c-Raf抗体

淀粉-化试纸 SZ化原癌因c-Raf抗体

汞试纸 0-10ppm化原癌因c-Raf抗体