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选择ELISA试剂盒应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
产品名称:大鼠多巴胺D2受体(D2R)elisa试剂盒
英文名称:Rat dopamine D2 receptor,D2R ELISA Kit
规格:48T/96T
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
抑制素βE(INHβE)(酶联免疫吸附试验法) 97% 扣囊复膜孢酵母 5g
突触素(SYP)(酶联免疫吸附试验法) 98% 金黄壳囊孢菌 1g
Slit同源物2(Slit2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 多主棒孢菌 25g
囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)(酶联免疫吸附试验法) 98% 毛霉属 5g
谷胱甘肽S转移酶θ2(GSTθ2)(酶联免疫吸附试验法) 钌含量59.5% 乙酸钙不动杆菌 1g
谷胱甘肽S转移酶θ2(GSTθ2)(酶联免疫吸附试验法) 钌含量59.5% 点柄粘盖牛肝 5g
谷胱甘肽S转移酶θ2(GSTθ2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 弗雷德里克斯堡假单胞菌 1g
血小板衍生生长因子D(PDGFD)(酶联免疫吸附试验法) 98% 酿酒酵母 25g
组织蛋白酶C(CTSC)(酶联免疫吸附试验法) 98% Paraburkholderia sp. 5g
VI型胶原(COL6)(酶联免疫吸附试验法) ≥97% 短小芽孢杆菌 100mg
载脂蛋白C4(APOC4)(酶联免疫吸附试验法) 98% 紫麦角菌 100g
性别决定区Y框蛋白2(SOX2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 艾登短芽孢杆菌 25g
八聚体结合转录因子4(OCT4)(酶联免疫吸附试验法) 98% 节杆菌 500g
Kruppel样因子4(KLF4)(酶联免疫吸附试验法) 98% 雷州湾芽孢杆菌 100ml
V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)(酶联免疫吸附试验法) 98% 亮白曲霉 25ml
氧化低密度脂蛋白(OxLDL)(酶联免疫吸附试验法) 98% 鞘氨醇单胞菌属 1g
补体成分9(C9)(酶联免疫吸附试验法) 98% 变异居白蚁菌 5g
生长激素(GH)(酶联免疫吸附试验法) ≥98% 干酪乳杆菌 1g
大鼠多巴胺D2受体(D2R)elisa试剂盒电转印DNA南方杂交 AA(Arachidonic Acid) 100 ul
DNA狭缝杂交(SLOT BLOT) VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) 100 ul
寡核苷酸探针同位素法DNA南方杂交* VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor165) 100 ul
寡核苷酸探针非同位素HRP化学发光法DNA南方杂交* VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) 100 ul
寡核苷酸探针非同位素AP化学发光法DNA南方杂交* VIL1(Villin 1) 100 ul
寡核苷酸探针非同位素辛化学发光法DNA南方杂交* VEGF-D(Vascular Endothelial Growth Factor D) 100 ul
寡核苷酸探针非同位素HRP-DAB显色法DNA南方杂交* τPK1(Tau-Protein Kinase) 20 ul
寡核苷酸探针非同位素AP-BCIP/NBT法DNA南方杂交* TPA(Tissue Polypeptide Antigen) 100 ul
寡核苷酸探针非同位素辛AP-BCIP/NBT法DNA南方杂交* TPS(Tryptase) 100 ul
S1核酶保护法 TPPP(Tubulin Polymerization Promoting Protein) 20 ul
同位素法DNA斑点杂交 TrxR1(Thioredoxin Reductase 1) 100 ul
非同位素HRP化学发光法DNA斑点杂交 TRY(Trypsin) 100 ul
非同位素AP化学发光法DNA斑点杂交 TSHRAb(Thyroid Stimulating Hormone Receptor Antidoby) 100 ul
非同位素辛化学发光法DNA斑点杂交 TSP-1(Thrombospondin-1) 100 ul
非同位素HRP-DAB显色法DNA斑点杂交 ucOC(Undercarboxylated Osteocalcin) 100 ul
非同位素AP-BCIP/NBT法DNA斑点杂交 UBE1L(Ubiquitin Activating Enzyme E1 Like Protein) 100 ul
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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