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保存方法：

传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙 [3] 。

液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

悬液保存法：

① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。

常用的冷冻保存法：

① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是适用范围*的微生物保存法。

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菌种的培养：

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

微生物菌种的培养：

⒈ 孢子制备

⑴ 孢子的制备

一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1％，氮源不超过0.5％)，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。面的培养温度大多数为28 ℃，少数为37 ℃，培养时间为5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制备　

霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25～28 ℃，培养时间为4～14天。

⒉ 种子制备

⑴ 摇瓶种子制备　

摇瓶种子进罐，常采用母瓶、子瓶两级培养，有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和*，并易被菌体分解利用，氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓，子瓶培养基浓度比母瓶略高，更接近种子罐的培养基配方。

⑵ 种子罐种子制备　

种子罐种子制备的工艺过程，因菌种不同而异，一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中，经培养后形成大量的菌丝，这样的种子称为一级种子，把一级种子转入发酵罐内发酵，称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内，经过培养形成更多的菌丝，这样制备的种子称为二级种子，将二级种子转入发酵罐内发酵，称为三级发酵。同样道理，使用三级种子的发酵，称为四级发酵。

4,4,4-三氟巴豆酸乙酯 98%十氢喹啉（顺式+反式） 98%Smad4(Mothers against decapentaplegic homolog 4)  Smad4抗原

3--4,4,4-三氟酸乙酯 97%3,3-二乙氧基酸乙酯 95%Smad7(Mothers against decapentaplegic homolog 7)  Smad 7(多肽)

4,4,4-三氟乙酰乙酸乙酯 98%2-基-3,3-二苯基烯酸-2-乙基己酯 97%phosphor-SMAD(p-Ser425)、phosphor-Mothers against decapentaplegic  化SMAD(p-Ser425)抗原

羟基酪  98%3-乙氧基烯酸乙酯 98%SNAP-25 (synaptosomal-associated protein 25)  突触相关膜蛋白25抗原

3-羟基 98%1-乙基 98%Snail  Snail蛋白抗原

1,2-戊二 98%金雀异黄酮 97%Socs 3 (suppressor of cytokine signaling 3)  因子信号传导抑制蛋白3抗原

3,4-二氯苯甲 97%7-羟基-3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮 97%SOD1(superoxide-dimutase-1)  超氧化物歧化1抗原

2,3-二氯甲苯 98.0%1-甲基 97%SOD2 (superoxide-dimutase-2)  超氧化物歧化2抗原

明亮发光杆菌N,N,N',N'-四-1,3-二 97%兔子质金属蛋白5(MMP-5)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框52抗体RAC2  G蛋白P21 RAC2抗体

纳米氮化铝 99.9% metals basis,50nm兔子质金属蛋白4(MMP-4)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框67抗体RAC1+RAC2  GTP结合蛋白RAC1+RAC2抗体

氮化铝 N >33.0%， D50/2.0 μm兔子质金属蛋白3(MMP-3)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框83抗体RAC1/MIG5  迁移诱导因子5抗体

氮化铝 N >32.5 % ，D97/5.0 μm兔子质金属蛋白13(MMP-13)免疫试剂盒富含半胱氨分泌蛋白3抗体RABX5/Rabex5  G蛋白相关RABX5抗体

纳米钡铁氧体 30-50nm 球形 99.5%兔子肌钙蛋白C(TnC)免疫试剂盒肿瘤/抗原26抗体RABGAP1  Rab蛋白GTP激活蛋白1抗体

纳米钡铁氧体 200nm,99%兔子黄体生成素(LH)免疫试剂盒周期蛋白依赖性激抑制剂2C抗体Rabbit Anti-rat IgM/RBITC  罗丹明标记的兔抗大鼠IgM

纳米铋粉 99.9% metals basis,40nm,球形兔子环鸟苷(cGMP)免疫试剂盒Cullin2抗体Rabbit Anti-rat IgM/PE-Cy7  PE-Cy7标记的兔抗大鼠IgM

三氧化二铬 60nm 球形，98.0%兔子核因子-κB亚p65亲和肽(NF-κB p65)免疫试剂盒钙调蛋白激CaMK1D抗体Rabbit Anti-rat IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的兔抗大鼠IgM

纳米铁钴 40nm 球形 99.5%兔子核因子κB(NF-κB)免疫试剂盒CHX10蛋白抗体Rabbit Anti-rat IgM/PE-CY5  PE-CY5标记的兔抗大鼠IgM

纳米碳粉 99.5%，30nm兔子胱天蛋白3(Casp-3)免疫试剂盒畸胎瘤衍化生长因子单克隆抗体(C端)Rabbit Anti-rat IgM/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗大鼠IgM

四氧化三钴 30nm 球形，99.5%兔子骨形成蛋白2(BMP2)免疫试剂盒周期蛋白依赖性激抑制剂2B抗体Rabbit Anti-rat IgM/PE  PE标记的兔抗大鼠IgM

氧化镝 40nm 球形，99.5%兔子骨涎蛋白(BSP)免疫试剂盒畸胎瘤衍化生长因子单克隆抗体Rabbit Anti-rat IgM/HRP  辣根过氧化物标记的兔抗大鼠IgM

石墨 99%，40nm兔子骨胶原交联/Ⅰ型胶原C端肽(Cr/CTX-Ⅰ)免疫试剂盒泛素连接蛋白CHFR抗体Rabbit Anti-rat IgM/Gold  胶体金标记的兔抗大鼠IgM

纳米羟灰石 nanopowder,<100 nm particle size (BET), ≥97%兔子骨胶原交联(Cr)免疫试剂盒Cullin1抗体Rabbit Anti-rat IgM/FITC  FITC标记的兔抗大鼠IgM

纳米四氧化三铁 99.5%,20nm 球形兔子骨碱性(BALP)免疫试剂盒肌动蛋白结合蛋白CFL抗体Rabbit Anti-rat IgM/Cy7  Cy7标记的兔抗大鼠IgM