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选择ELISA试剂盒应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
产品名称:大鼠白介素6(IL-6)elisa试剂盒
英文名称:Rat Interleukin 6,IL-6 ELISA KIT
规格:48T/96T
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
肿瘤坏死因子受体超家族成员1B(TNFRSF1B)(酶联免疫吸附试验法) 98% 印度农霉菌 1g
甘氨酰tRNA合成酶(GARS)(酶联免疫吸附试验法) 98% 塔宾曲霉 25g
氢/钾离子交换ATP酶β肽(ATP4β)(酶联免疫吸附试验法) 98% *松乳菇 5g
尿卟啉原脱羧酶(UROD)(酶联免疫吸附试验法) 97% 乌饭树拟茎点霉 1g
心肌肌钙蛋白T(TNNT2)(酶联免疫吸附试验法) 97% 豇豆慢生根瘤菌 5g
TATA框结合蛋白关联因子13(TAF13)(酶联免疫吸附试验法) 98% 阪崎肠杆菌 5g
核转录因子Y亚基γ(NFYC)(酶联免疫吸附试验法) 98% 淡黄曲霉 25g
细胞程序性死亡蛋白5(PDCD5)(酶联免疫吸附试验法) 98% 黑曲霉 5g
类固醇5α还原酶1(SRD5α1)(酶联免疫吸附试验法) 97% 裂孔平伏菌 1g
白介素5受体α(IL5Rα)(酶联免疫吸附试验法) 97% 菊苣假单胞菌 25g
Ⅴ型胶原α2(COL5α2)(酶联免疫吸附试验法) 97% 酿酒酵母 5g
促肾上腺皮质激素受体(ACTHR)(酶联免疫吸附试验法) 98% 烟酸芽孢杆菌 1g
腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)(酶联免疫吸附试验法) 98% 枯草芽孢杆菌 5g
无翅型MMTV整合位点家族成员11(WNT11)(酶联免疫吸附试验法) 98% 酿酒酵母 100g
Notch2氨基端样蛋白(NOTCH2NL)(酶联免疫吸附试验法) 98% 华根霉 25g
伴刀豆球蛋白A(ConA)(酶联免疫吸附试验法) 98% 黄伞(可订购) 5g
凝血酶原片段F1+2(F1+2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 毕赤酵母 25g
肾上腺素能受体α2C(ADRα2C)(酶联免疫吸附试验法) 98% 弗氏链霉菌 5g
大鼠白介素6(IL-6)elisa试剂盒血液一氧化氮合成酶总活性荧光定量 TRMU (Mitochondrial tRNA-specific 2-thiouridylase 1) 20 ul
尿液一氧化氮合成酶总活性荧光定量 TRIO (Triple functional domain protein) 100 ul
细胞结构型神经元一氧化氮合成酶(cNOS//nNOS)活性比色法定量 SUPT5H (Transcription elongation factor SPT5) 100 ul
组织结构型神经元一氧化氮合成酶(cNOS//nNOS)活性比色法定量 DAO(D-amino-acid oxidase) 100 ul
血液结构型神经元一氧化氮合成酶(cNOS//nNOS)活性比色法定量 TPRA1 (Transmembrane protein adipocyte-associated 1 homolog) 100 ul
体液结构型神经元一氧化氮合成酶(cNOS//nNOS)活性比色法定量 TMPPE (Transmembrane protein with metallophosphoesterase domain) 100µl
细胞诱导型巨噬细胞一氧化氮合成酶(iNOS /NOS2/mNOS)活性比色法定量 IGFLR1 (IGF-like family receptor 1) 100 ul
组织诱导型巨噬细胞一氧化氮合成酶((iNOS /NOS2/mNOS))活性比色法定量 TRAF3IP3 (TRAF3-interacting JNK-activating modulator) 100 ul
血液诱导型巨噬细胞一氧化氮合成酶((iNOS /NOS2/mNOS))活性比色法定量 TBKBP1 (TANK-binding kinase 1-binding protein 1) 20 ul
体液诱导型巨噬细胞一氧化氮合成酶((iNOS /NOS2/mNOS))活性比色法定量 TEFM (Transcription elongation factor, mitochondrial) 100 ul
细胞结构型内皮细胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量 TP53RK (TP53-regulating kinase) 100 ul
组织结构型内皮细胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量 TANK (TRAF family member-associated NF-kappa-B activator) 20 ul
血液结构型内皮细胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量 TSKS (Testis-specific serine kinase substrate) 100 ul
体液结构型内皮细胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量 TOPORS (E3 ubiquitin-protein ligase Topors) 100 ul
细胞结构型神经元一氧化氮合成酶(cNOS//nNOS)活性荧光定量 ADA(Adenosine deaminase) 100 ul
组织结构型神经元一氧化氮合成酶(cNOS//nNOS)活性荧光定量 ELOVL1(Elongation of very long chain fatty acids protein 1) 100 ul
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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