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实验流程:
1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;
2. 加样(标准品及样本)100µL,37°C孵育1小时;
3. 吸弃,加检测溶液A100µL,37°C孵育1小时;
4. 洗板3次;
5. 加检测溶液B100µL,37°C孵育30分钟;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分钟;
8. 加终止液50µL,立即450nm读数。
公司采用的全是进口原材料研,发灵敏性高,高效性,*抗体,吸附均匀、吸附性好,回收利用率高、可靠性强,无效包退包换,公司提供免费代测服务,各种种属ELISA试剂盒产品齐全,质量可靠。
产品名称 | 大鼠表皮生长因子受体(EGFR)elisa试剂盒 |
英文名称 | Rat epidermal growth factor receptor,EGFR ELISA kit |
货号 | GOY-R74428 |
样品收集、处理及保存:
1).细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。
2)细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
3)血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。
4)血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。
5)体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。
6.)组织标本:切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000 rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。
样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
检测程序:
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0分钟。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37℃暗处反应15 分钟。
8. 每孔加入100ul 终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在450 nm处测吸光值。
肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)(酶联免疫吸附试验法) 98% 花楸盘多毛孢 5g
P物质(SP)(酶联免疫吸附试验法) 98% Pseudomonas koreensis Kwon et al. 1g
皮质醇(Cortisol)(酶联免疫吸附试验法) 98% 蜡样芽孢杆菌 500mg
尿调蛋白(UMOD)(酶联免疫吸附试验法) 98% 巴斯德驹形氏酵母 5g
异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)(酶联免疫吸附试验法) 98% 巴西果小克银汉霉 1g
N-乙酰神经氨酰酸合酶(NANS)(酶联免疫吸附试验法) 98% 根瘤菌 25g
4-羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPD)(酶联免疫吸附试验法) 98% 绿毛壳拟毛梭孢变种 5g
碘甲腺原氨酸脱碘酶Ⅲ(DIO3)(酶联免疫吸附试验法) >97.0%(GC) 枯草芽孢杆菌 1g
氢离子转运ATP酶溶酶体辅助蛋白2(ATP6AP2)(酶联免疫吸附试验法) >97.0%(GC) 费尔氏酵母 5g
芳香烃受体核转位因子(ARNT)(酶联免疫吸附试验法) 97% 酿酒酵母 1g
白细胞衍生趋化因子2(LECT2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 大毛霉 100g
肿瘤坏死因子α诱导蛋白2(TNFαIP2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 稻田弯曲嗜酸菌 25g
环腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH)(酶联免疫吸附试验法) 98% 朱黄篮状菌 500g
Klothoβ蛋白(KLβ)(酶联免疫吸附试验法) 98% 胶孢炭疽菌 100g
脯氨酰4-羟化酶α多肽Ⅱ(P4Hα2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 小孢根霉须状变种 25g
N-myc下游调节基因2(NDRG2)(酶联免疫吸附试验法) 98% 假单胞菌属 5g
骨桥素(OPN)(酶联免疫吸附试验法) ≥97% 新城疫病毒 25MG
70kDa热休克蛋白8(HSPA8)(酶联免疫吸附试验法) 97% 核盘菌 1g
大鼠表皮生长因子受体(EGFR)elisa试剂盒冰冻切片胆色素史汀(Stein)染色 OR51E2(Olfactory receptor 51E2) 20 ul
石蜡切片胆色素格美林(Gmelin)染色 LY6G6F(Lymphocyte antigen 6 complex locus protein G6f) 100 ul
冰冻切片胆色素格美林(Gmelin)染色 FCGBP(IgGFc-binding protein) 100 ul
细胞中性脂质尼罗红染色 PIBF(Progesterone-induced-blocking factor) 100 ul
石蜡切片中性脂质尼罗红间接染色 HLA-E(HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E) 100 ul
石蜡切片中性脂质尼罗红直接染色 MRC1(Macrophage mannose receptor 1) 100 ul
冰冻切片中性脂质尼罗红染色 NARG2(NMDA receptor-regulated protein 2) 20 ul
细胞中性脂质苏丹黑染色 PYY2(Putative peptide YY-2) 100 ul
石蜡切片中性脂质苏丹黑间接染色 ZFAND6(AN1-type zinc finger protein 6) 20 ul
石蜡切片中性脂质苏丹黑直接染色 MACC1(Metastasis-associated in colon cancer protein 1) 100 ul
冰冻切片中性脂质苏丹黑染色 NMES1(Normal mucosa of esophagus-specific gene 1 protein) 100 ul
细胞中性脂质油红O染色 IZUMO1(Izumo sperm-egg fusion protein 1) 100 ul
石蜡切片中性脂质油红O间接染色 AQP12A(Aquaporin-12A) 100 ul
石蜡切片中性脂质油红O直接染色 NLRC4(NLR family CARD domain-containing protein 4) 100 ul
冰冻切片中性脂质油红O染色 ZMAT3(Zinc finger matrin-type protein 3) 20 ul
细胞总胆固醇高氯酸萘醌(PAN)染色 WNT5B(Protein Wnt-5b) 100 ul
操作步骤:
1)运用前,将所有试剂充沛混匀。不要使液体发生很多的泡沫,防止加样时参加很多的气泡,发生加样上的差错。
2)依据待测样品数量加上规范品的数量决议所需的板条数。每个规范品和空白孔主张做复孔。每个样品依据自个的数量来定,能运用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后参加50ul于反响孔内。
3)参加稀释好后的规范品50ul于反响孔、参加待测样品50ul于反响孔内。当即参加50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,悄悄振动混匀,37℃温育1小时。
4)甩去孔内液体,每孔加满洗刷液,振动30秒,甩去洗刷液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷,洗刷次数添加一次。
5)每孔参加80ul的亲和链酶素-HRP,悄悄振动混匀,37℃温育30分钟。
6)甩去孔内液体,每孔加满洗刷液,振动30秒,甩去洗刷液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷,洗刷次数添加一次。
7)每孔参加底物A、B各50ul,悄悄振动混匀,37℃温育10分钟。防止光照。
8)取出酶标板,敏捷参加50ul停止液,参加停止液后应当即测定成果。
9)在450nm波利益测定各孔的OD值。
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