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货号 | GOY-01S6868 |
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商品属性:
产品名称 | |
规格 | 100管/48样 |
检测方法 | 微量法 |
货号 | GOY-01S6868 |
商品介绍:
测定意义
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中,而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基产生红色化合物,在585nm处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板,甲苯、蒸馏水。
实验方法学:
一、肝素的配制: 市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液样本的收集: 全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。 1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。 2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA。 |
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
卷曲螺旋结构域蛋白6抗体(状甲状腺癌编码蛋白)Human CPR(Cytochrome P450 Reductase) ELISA Kit人抗磷脂抗体(Apl/APA)ELISA试剂盒,Apl/APA ELISA kit
周期素依赖激2相关蛋白2抗体Human CPP(Copeptin) ELISA Kit人抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒,ANA ELISA
1号染色体开放阅读框201抗体Human CPE(Carboxypeptidase E) ELISA Kit人抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA试剂盒,PA-IgG/M/A ELI
卷曲螺旋结构域蛋白7抗体Human CREB(Cyclic AMP Response Element Binding Protein) ELISA Kit人抗中性粒核周抗体(pANCA)ELISA试剂盒,pANCA ELISA
卷曲螺旋结构域蛋白80抗体Human CR1(Complement Receptor type 1) ELISA Kit人钩端螺旋体IgM(Lebtospira)ELISA试剂盒,Lebtospira ELISA
CD163蛋白样1抗体Human CX26(Connexin 26) ELISA Kit人肽基脯氨酰顺反异构(PPI)ELISA试剂盒,
周期素依赖性激5调节蛋白1样蛋白1抗体Human COL5α2(Collagen Type V Alpha 2) ELISA Kit人组织蛋白D(cath-D)ELISA试剂盒, cath-D ELISA
22号染色体开放阅读框31抗体Human CRLF1(Cytokine Receptor Like Factor 1) ELISA Kit人胰激肽原(PK)ELISA试剂盒, PK ELISA
土壤几丁质酶微量法检测试剂盒大鼠基质金属蛋白9/明胶B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫试剂盒进口、分装
猪αN乙酰葡糖胺糖苷(NAGLU)免疫试剂盒*直销
大鼠甘肽S转移P(GSTP1)免疫试剂盒现货供应
羊抗单链DNA抗体/变性DNA(ssDNA)抗体免疫试剂盒*直销
犬结蛋白(Des)免疫试剂盒进口、分装
牙本质基质蛋白1(DMP1)免疫试剂盒进口、组装
大鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)免疫试剂盒进口、分装
大鼠B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子α(NFKBIA)免疫试剂盒*直销
大鼠内皮素转换1(ECE1)免疫试剂盒进口、分装
大鼠肺炎支原体(MP)抗体免疫试剂盒进口、组装
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
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