线粒体活性氧产生速率（ROS）荧光法 返回列表页

选择抗凝的注意点：

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

商品属性：

商品介绍：

测定意义

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，研究表明，机体95％以上的活性氧（ROS）都来自于线粒体，其失衡所致的氧化应激与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程有关。

正常情况下，细胞内抗氧化防御系统与氧自由基处于平衡状态，细胞内活性氧（ROS）水平维持在较低的生理范围；在病理情况下，细胞内抗氧化系统与氧自由基的平衡被打破，细胞内活性氧水平过多，就可破坏线粒体酶类、脂类和核酸，使机体出现氧化应激，同时，活性氧还可攻击线粒体DNA产生氧化损伤，导致线粒体ATP合成减少、线粒体膜电位破坏等结构和功能变化。

因此，通过检测活性氧的变化来判断线粒体的功能是否正常具有重要意义。

测定原理：

荧光探针-还原型二氯荧光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可扩散通过线粒体膜，在线粒体内被酯酶水解，形成无荧光的DCFH，DCFH迅速与ROS反应生成荧光物—氧化型二氯荧光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根据上述原理设计了利用荧光法直接定量检测线粒体ROS产生速率的方法。将荧光强度随时间变化的数据点拟合，线性回归直线斜率与ROS产生的速率呈正比。

需自备的仪器和用品：

多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。

实验方法学：

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.        每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.       依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。

Fmoc-D- BR2.4-D丁酯 分析标准品，99%Anti-Phospho-FLT3 (Tyr589/591) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化FMS样激3抗体IgG

芴甲氧羰酰基-6-己酸 98%2.4-D丁酯标准溶液 100μg/ml,u=3%Anti-Phospho-FLT3 (Tyr842) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化FMS样激3抗体IgG

FMOC--4-甲酸 97%2.5-D丁酯标准溶液10μg/ml,u=6%,溶剂:正己烷Anti-Phospho-FLT3 (Tyr969) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化FMS样激3抗体IgG

N'-芴甲氧羰基-N-苄氧羰基-L-赖 98.0%2,4-滴异辛酯  分析标准品Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC  荧光素标记血管内皮生长因子受体-3IgG

N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-D- 97%顺式戊菊酯 分析标准品，99%Anti-VEGFR-3/FITC  荧光素标记血管内皮生长因子受体-3抗体IgG

FLAG® Peptide菊酯 分析标准品，99.5%Anti-HSP-70/RBITC  罗丹明标记热休克蛋白-70抗体IgG

纤维蛋白肽 B 人类 ≥97% (HPLC)基阿维菌素苯甲酸盐 分析标准品，90.5%Anti-VHL/FITC  荧光素标记一种肿瘤抑制因子抗体IgG

甘-L-亮 98%乙蒜素 分析标准品，99%Anti-Vimentin/FITC  荧光素标记波形蛋白抗体IgG

线粒体活性氧产生速率（ROS）荧光法检测试剂盒环溴 99%Anti-BrdU  溴脱氧尿苷抗体人钙非依赖性脂A2(iPLA2)联免疫吸附测定试剂盒

环溴 98%Anti-BRN3A  转录因子Brn3蛋白抗体人鸟苷环化激活因子2B(GUCA2B)联免疫吸附测定试剂盒

对叔丁酯 99%Anti-Brs3/Bombesin Receptor 3  蛙皮素受体3抗体人颗粒K(GZMK)联免疫吸附测定试剂盒

对氨乙酮 99%Anti-SMARCA4/SNF2 beta  抑癌因SNF2β抗体人花生四烯脂加氧3(ALOXE3)联免疫吸附测定试剂盒

4-羟二酮 98%Anti-Brucella  布鲁氏菌抗体人色素P450家族成员26A1(CYP26A1)联免疫吸附测定试剂盒

2-巯-1-咪唑 98%Anti-BRMS-1  癌转移抑制因1抗体人血红蛋白(HB)联免疫吸附测定试剂盒

环己盐盐 电子级Anti-Brucella  布氏杆菌菌体蛋白抗体人全色素C合(HCCS)联免疫吸附测定试剂盒

二乙酰一肟 ARAnti-BSA  牛血清白蛋白抗体人钙/钙调蛋白依赖性蛋白激IIα(CAMK2α)联免疫吸附测定试剂盒

二乙酰一肟  >98.0%(GC)Anti-BSEP  胆汁盐输出泵蛋白抗体人Bcl2关联永生因3(BAG3)联免疫吸附测定试剂盒

氢 AR,≥47.0%Anti-Bone sialoprotein  骨涎蛋白抗体人芳硫酯B(ARSB)联免疫吸附测定试剂盒  

钠 80%（剧品）Anti-BTG2/TIS21  B迁移因2抗体人组氨丰富糖蛋白(HRG)联免疫吸附测定试剂盒

间溴氟 99%Anti-BTK/ATK  蛋白酪氨激ATK抗体人硫乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)联免疫吸附测定试剂盒

三氧化二锑 SPAnti-Phospho-Btk(Ser180)  化蛋白酪氨激ATK抗体人膜联蛋白A5(ANXA5 )联免疫吸附测定试剂盒  

三氧化二锑 99.99% metals basisAnti-Phospho-Btk(Tyr223)  化蛋白酪氨激ATK抗体人HtrA丝氨肽1(HTRA1)联免疫吸附测定试剂盒

锑粒 99.999% metals basis,beads,1-6 mmAnti-C5a  过敏素C5a（补体C5a）抗体人白介素10受体β(IL10Rβ)联免疫吸附测定试剂盒