EPI300 电击感受态细胞50ul*5说明书 返回列表页

操作方法：
一 、EPI300 电击感受态细胞50ul*5说明书热激转化法
1.    从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后，吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中，加入质粒或连接产物，轻轻混匀，冰浴30分钟。
2.    42℃水浴热激60秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动摇菌管。
3.    向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB（SOC培养基可提高2-3倍转化效率），37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4.    根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收，倒置平       板，37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
二、10分钟快速转化法                             
注：在使用卡那霉素，四环素等作为筛选抗性时，需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率，当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时，该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基，在37℃ 180rpm孵育1小时，然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. DH 5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手EP管底轻轻混匀，冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

使用说明：
1． EPI300 电击感受态细胞50ul*5说明书取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3． 42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5． 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

培养方法：
EPI300 电击感受态细胞50ul*5说明书收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况，如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。
培养实验又要开始了，科研工作者又该忙碌了，大家可能都在寻找适合自己的细胞，不用急，我们帮您掌舵，让您满意！
传代方法：细胞*汇合时，倒掉旧液，加入消化液（0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA）2ml消化，显微镜下观察细胞*脱离瓶壁分离成单个细胞后弃掉胰酶，加培养基混匀分瓶，T25瓶中加培养基至6-8ml，T75瓶加培养基至20ml，37℃，5%CO2孵箱培养。
中文名称：EPI300 电击感受态细胞50ul*5说明书
规格：50ul*5
用途：生化试剂。（用于科研试验研究）  
储存条件: -70℃保存，必须加干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。
外观:（性状） 干冰运输，单加10kg干冰费
单位: 袋

ELISA Kit for Human Dentin matrix acidic phosphoprotein 1

96T93.75-6000 pg/mL人β-防御素127(β-DF127)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Beta-defensin 127

96T7.8-500 pg/mL人β-防御素129(β-DF129)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Beta-defensin 129

96T0.625-40 ng/mL人β-防御素126(β-DF126)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Beta-defensin 126

96T15.6-1000 pg/mL人发动蛋白1(DNM1)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Dynamin-1

96T15.6-1000 pg/mL人防御素5(DEF5)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Defensin-5

96T78-5000 pg/mL人中性粒细胞防御素1(Neutrophil defensin 1)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Neutrophil defensin 1

96T0.78-50 ng/mL人地塞米松诱导蛋白(DEXI)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Dexamethasone-induced protein
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48T猪水泡性口炎病毒(VSV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)48T猪水泡性口炎病毒(VSV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

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