大鼠心肌成纤维细胞 返回列表页

实验操作步骤：  

a．采用认可的方案处死啮齿动物。

b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。

c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。

d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。

e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。

产品属性：

产品介绍：

名称    大鼠心肌成纤维细胞

2.组织来源：心脏组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

大鼠心肌成纤维细胞分离自心脏组织；心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成，非心肌细胞占细胞总数的70%，其中90%以上的非心肌细胞由心肌成纤维细胞组成。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的心肌成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。近年来，人们逐渐了解到非心肌细胞不仅对心肌细胞具有结构上的支持、保护作用，而且还具有自分泌和旁分泌功能，影响心肌细胞的结构和生理功能；心肌成纤维细胞主要功能为对心肌细胞起结构支持作用并负责细胞基质外的合成，当心肌损伤时能产生旁分泌生长因子。心肌成纤维细胞是心脏结缔组织中最常见的细胞，可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维及有机基质，并且在外伤等因素刺激下，部分纤维细胞可重新转变为幼稚的成纤维细胞，其功能活动也得以恢复，参与组织损伤后的修复。因此，对心肌成纤维细胞的生理学研究成为现代心血管领域研究的一个重点。

5.方法简介：

()实验室分离的大鼠心肌成纤维细胞采用胶原酶-联合消化结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：

()实验室分离的大鼠心肌成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

产品货号CM-R074

换液频率每2-3天换液一次

生长特性贴壁

细胞形态成纤维细胞样

传代特性可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液0.25%

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

处理方法：

收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题，请即时联系。并进行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2. 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

3. 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

4. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）。

5. ①若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上，进行传代。

注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，

避免开盖时试剂损失。

3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗

并*清除残留清洁剂。

6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

细胞培养的优点：

1.研究的对象是活细胞

在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2.研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。

3.研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备

记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。

5.研究的范围比较广泛

应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；

适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。

6.研究的费用相对较经济

可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

25mL Tricine-SDS Sample Buffer,2X), reducing  Tricine-SDS Sample Buffer,2X), reducing  常温保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Hepatocyte growth factor receptor

100µL 小鼠抗c-Myc标签单抗 Anti c-Myc-Tag Mouse MAb -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Protein W

大鼠心肌成纤维细胞100mL RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.0  常温

2 ug pEGFP- C2 pEGFP- C2 低温运输，-20℃保存

100mL YPD液体培养基 YPG Liquid Medium 常温

100次 转ESPES基因植物PCR Mix （35S-EPSES 基因） Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

葡萄糖肉汤 Dextrose Broth 250g

DOG-1/TMEM16A  跨膜蛋白16A/钙激活氯离子通道抗体 规格: 0.1ml

支原体肉汤培养基 Mycoplasma Broth Medium 250g

NF-ATc4  T细胞激活核转录因子4抗体 规格: 0.2ml

500mL Lysis Buffer,pH8.0  Lysis Buffer,pH8.0  常温保存

CDKN1C/p57 Kip2  周期蛋白依赖激抑制因子1C抗体 规格: 0.1mlMrpL39  线粒体核糖体蛋白L39 规格: 0.1ml

1瓶 HeLa 229细胞株 HeLa 229 低温运输和保存

phospho-NFKBIE (Ser157)  磷酸化KB抑制蛋白激ε 规格: 0.1ml