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单胺氧化酶(MAO)可见分光光度法检测试剂盒

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所  在  地上海市

更新时间:2022-04-28 09:04:43浏览次数:188次

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货号 GOY-01S6932
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商品属性:

产品名称

单胺氧化酶(MAO)可见分光光度法检测试剂盒

规格

50管/48样

检测方法

可见分光光度法

货号

GOY-01S6932

商品介绍:

测定意义

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官,特别是分泌腺、脑、肝脏,在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢,含量较低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纤维化的程度。此外,MAO活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱,从而引发多种病症。

测定原理:

MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛,进一步氧化成酸;底物在360nm处有特征吸收峰,测定360nm光吸收下降的速率,计算MAO活性。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、1 mL玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg1克瓶装,每瓶140000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50100μl湿润管壁,可抗凝人血35ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔510分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置12小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

茴香 分析标准品,>99% (GC)位辛内酯  99%Anti-Phospho-CDC42 (Ser71) /FITC  荧光素标记化分化周期CDC42蛋白抗体IgG

茴香 ≥98%, FCC位辛内酯  98%, FCC,KosherAnti-Jagged1/CD339 /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠Jagged1/CD339抗体IgG

香茅  96%丁位辛内酯  98%Anti-CDK1/FITC  荧光素标记周期素依赖性激1抗体IgG

香芹酮 99%丁位十一内酯 98%Anti-CDK2/FITC  荧光素标记周期素依赖性激2抗体IgG

97%2- CP(剧品)Anti-CDK3 /FITC  荧光素标记周期素依赖性激3抗体IgG

肉桂酸乙酯 99%2- GR(剧品)Anti-CDK4/FITC  荧光素标记周期素依赖性激4抗体IgG

99%2- Standard for GC(剧品)Anti-CDK5/FITC  荧光素标记周期素依赖性激5抗体IgG

柠檬 97%钨 99.95%,0.5mm 直径Anti-CDK6/FITC  荧光素标记周期素依赖性激6抗体IgG

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操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

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