鸡败血支原体PCR检测试剂盒说明书 返回列表页

组成及试剂配制:
1、鸡败血支原体PCR检测试剂盒说明书 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。
【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得医疗器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用FAM通道。

DEFβ127 ELISA Kit艾滋病病毒抗体防御素β127(DEFβ127)ELISA试剂盒
DEFβ126 ELISA Kit艾滋病病毒抗体防御素β126(DEFβ126)ELISA试剂盒
DEFβ125 ELISA Kit艾滋病病毒抗体防御素β125(DEFβ125)ELISA试剂盒
DEFβ124 ELISA Kit结合珠蛋白相关蛋白抗体防御素β124(DEFβ124)ELISA试剂盒
DEFβ123 ELISA KitL-组氨酸脱羧酶抗体防御素β123(DEFβ123)ELISA试剂盒
DEFβ121 ELISA Kit乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白防御素β121(DEFβ121)ELISA试剂盒
DEFβ119 ELISA Kit组蛋白H2B.s抗体防御素β119(DEFβ119)ELISA试剂盒
DEFβ118 ELISA Kit组蛋白去乙酰化酶4+5+9抗体防御素β118(DEFβ118)ELISA试剂盒
DEFβ116 ELISA Kit热休克蛋白27相关蛋白1抗体防御素β116(DEFβ116)ELISA试剂盒
DEFβ115 ELISA Kit卟胆原脱氨酶抗体防御素β115(DEFβ115)ELISA试剂盒
DEFβ114 ELISA Kit异质核糖核蛋白U2样蛋白抗体防御素β114(DEFβ114)ELISA试剂盒
DEFβ113 ELISA Kit肝癌衍生生长因子2抗体防御素β113(DEFβ113)ELISA试剂盒
DEFβ112 ELISA Kit肝癌相关抗原抗体57抗体防御素β112(DEFβ112)ELISA试剂盒
DEFβ110 ELISA Kit补体C3抗体防御素β110(DEFβ110)ELISA试剂盒
DEFβ103B ELISA Kit甲型流感病毒血凝素抗体防御素β103B(DEFβ103B)ELISA试剂盒
DEFβ103A ELISA Kit甲状旁腺功能亢进蛋白2/细胞分裂周期73抗体防御素β103A(DEFβ103A)ELISA试剂盒
DEFβ1 ELISA Kit线粒体丝氨酸蛋白酶抗体防御素β1(DEFβ1)ELISA试剂盒
DEFα6 ELISA Kit钾/钠超极化激活环核苷酸门控通道蛋白2抗体防御素α6(DEFα6)ELISA试剂盒
DEFα5 ELISA Kit热休克蛋白β7抗体防御素α5(DEFα5)ELISA试剂盒
DEFα3 ELISA Kit钾/钠超极化激活环核苷酸门控通道蛋白3抗体防御素α3(DEFα3)ELISA试剂盒
DEFα1 ELISA Kit铁调节蛋白25抗体防御素α1(DEFα1)ELISA试剂盒
AADAC ELISA KitHD域内含蛋白2抗体芳乙酰胺去乙酰化酶(AADAC)ELISA试剂盒
ARO ELISA Kit艾滋病病毒p55抗体芳香酶(ARO)ELISA试剂盒
AANAT ELISA Kit造血细胞激酶抗体芳香胺-N-乙酰基转移酶(AANAT)ELISA试剂盒
AHRR ELISA KitHEAT重复内含蛋白5B蛋白抗体芳烃受体抑制因子(AHRR)ELISA试剂盒
AFMID ELISA Kit缺氧诱导基因1B蛋白抗体芳犬尿氨酸甲酰胺酶(AFMID)ELISA试剂盒
ARSK ELISA Kit乙酰化组蛋白H4抗体芳基硫酸酯酶K(ARSK)ELISA试剂盒
ARSJ ELISA Kit热休克蛋白B2抗体芳基硫酸酯酶J(ARSJ)ELISA试剂盒
ARSI ELISA Kit人类白细胞抗原抗体B27芳基硫酸酯酶I(ARSI)ELISA试剂盒
ARSH ELISA Kit螺旋环螺旋转录因子HATH6抗体芳基硫酸酯酶H(ARSH)ELISA试剂盒
ARSG ELISA Kit神经调节蛋白1β2抗体芳基硫酸酯酶G(ARSG)ELISA试剂盒
ARSF ELISA KitHDHD3蛋白抗体芳基硫酸酯酶F(ARSF)ELISA试剂盒
ARSE ELISA KitHEATR3蛋白抗体芳基硫酸酯酶E(ARSE)ELISA试剂盒
ARSD ELISA Kit癌增强蛋白抗体芳基硫酸酯酶D(ARSD)ELISA试剂盒
ARSB ELISA Kit单甲基组蛋白H3K9抗体芳基硫酸酯酶B(ARSB)ELISA试剂盒
ARSA ELISA KitHDHD2B蛋白抗体芳基硫酸酯酶A(ARSA)ELISA试剂盒
PANK4 ELISA Kit造血干细胞特异性相关结合蛋白1抗体泛酸激酶4(PANK4)ELISA试剂盒
PANK3 ELISA KitI类组织相容性H-2抗原抗体D-Dalpha链抗体泛酸激酶3(PANK3)ELISA试剂盒
PANK2 ELISA KitHEAT重复内含蛋白5A蛋白抗体泛酸激酶2(PANK2)ELISA试剂盒
PANK1 ELISA Kit热休克蛋白70抗体泛酸激酶1(PANK1)ELISA试剂盒
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UCHL1 ELISA Kit透明质酸结合蛋白4抗体泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)ELISA试剂盒
UBE3A ELISA KitA型流感病毒H5N1凝集素抗体泛素连接酶E3A(UBE3A)ELISA试剂盒
UBE2L3 ELISA KitA型流感病毒核衣壳蛋白抗体泛素结合酶E2C结合蛋白E2L3(UBE2L3)ELISA试剂盒
UBE2C ELISA KitA型流感病毒核衣壳蛋白抗体泛素结合酶E2C(UBE2C)ELISA试剂盒
UBE2A ELISA KitA型流感病毒核衣壳蛋白抗体泛素结合酶E2A(UBE2A)ELISA试剂盒
UCRP ELISA KitB型流感病毒蛋白抗体泛素交叉反应蛋白(UCRP)ELISA试剂盒
UBE1L ELISA Kit人类状瘤病毒16-E7抗体泛素激活酶样蛋白(UBE1L)ELISA试剂盒
UBAP2 ELISA Kit跨膜蛋白酶丝氨酸1抗体泛素关联蛋白2(UBAP2)ELISA试剂盒
UBR4 ELISA Kit肺癌癌基因蛋白3抗体泛素蛋白连接酶E3成分N-识别蛋白4(UBR4)ELISA试剂盒
UBD ELISA Kit高密度脂蛋白抗体泛素D(UBD)ELISA试剂盒
UBC ELISA Kit蛋白激酶底物相关蛋白抗体泛素C(UBC)ELISA试剂盒
Ub ELISA Kit艾滋病病毒抗体泛素(Ub)ELISA试剂盒

反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。