11超级细菌PCR检测试剂盒说明书 返回列表页

组成及试剂配制:
1、11超级细菌PCR检测试剂盒说明书酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。
【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得医疗器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用FAM通道。

MT1 ELISA KitG蛋白偶联受体58抗体金属硫蛋白1(MT1)ELISA试剂盒
MPPE1 ELISA KitG蛋白偶联受体128抗体金属磷酸酯酶1(MPPE1)ELISA试剂盒
MPS1 ELISA KitG蛋白偶联受体128抗体金属泛激蛋白1(MPS1)ELISA试剂盒
ADAM9 ELISA KitG蛋白偶联受体146抗体解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒
ADAM8 ELISA KitG蛋白偶联受体146抗体解整合素金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒
ADAM33 ELISA KitG蛋白偶联受体17抗体解整合素金属蛋白酶33(ADAM33)ELISA试剂盒
ADAM28 ELISA KitG蛋白偶联受体19抗体解整合素金属蛋白酶28(ADAM28)ELISA试剂盒
ADAM22 ELISA KitG蛋白偶联受体20抗体解整合素金属蛋白酶22(ADAM22)ELISA试剂盒
ADAM19 ELISA KitG蛋白偶联受体21抗体解整合素金属蛋白酶19(ADAM19)ELISA试剂盒
ADAM17 ELISA KitG蛋白偶联受体22抗体解整合素金属蛋白酶17(ADAM17)ELISA试剂盒
ADAM15 ELISA KitG蛋白偶联受体25抗体解整合素金属蛋白酶15(ADAM15)ELISA试剂盒
ADAM12 ELISA KitG蛋白偶联受体26抗体解整合素金属蛋白酶12(ADAM12)ELISA试剂盒
ADAM10 ELISA KitG蛋白偶联受体27抗体解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)ELISA试剂盒
DSTN ELISA KitG蛋白偶联受体3抗体解聚蛋白(DSTN)ELISA试剂盒
MACC1 ELISA KitG蛋白偶联受体31抗体结肠癌转移关联基因1(MACC1)ELISA试剂盒
PER1 ELISA KitG蛋白偶联受体32抗体节律昼夜蛋白1(PER1)ELISA试剂盒
CNTNAP4 ELISA KitG蛋白偶联受体34抗体接触蛋白关联蛋白样蛋白4(CNTNAP4)ELISA试剂盒
CNTNAP2 ELISA KitG蛋白偶联受体35抗体接触蛋白关联蛋白样蛋白2(CNTNAP2)ELISA试剂盒
CNTNAP1 ELISA KitG蛋白偶联受体37/帕金森相关内皮素受体样受体抗体接触蛋白关联蛋白1(CNTNAP1)ELISA试剂盒
CNTN6 ELISA KitG蛋白偶联受体40抗体接触蛋白6(CNTN6)ELISA试剂盒
CNTN5 ELISA KitG蛋白偶联受体43抗体接触蛋白5(CNTN5)ELISA试剂盒
CNTN4 ELISA KitG蛋白偶联受体44抗体接触蛋白4(CNTN4)ELISA试剂盒
CNTN3 ELISA KitG蛋白偶联受体45抗体接触蛋白3(CNTN3)ELISA试剂盒
CNTN2 ELISA Kit同源盒蛋白GSC抗体接触蛋白2(CNTN2)ELISA试剂盒
CNTN1 ELISA Kit脊髓性肌症蛋白Gemin4抗体接触蛋白1(CNTN1)ELISA试剂盒
SCCPDH ELISA Kit脊髓性肌症蛋白Gemin5抗体酵母氨酸脱氢酶(SCCPDH)ELISA试剂盒
CAV3 ELISA Kit脊髓性肌症蛋白Gemin7抗体窖蛋白3(CAV3)ELISA试剂盒
CAV2 ELISA KitGTP结合丝裂原诱导T细胞蛋白抗体窖蛋白2(CAV2)ELISA试剂盒
CAV1 ELISA Kit染色体卷曲螺旋域包含蛋白1抗体窖蛋白(CAV1)ELISA试剂盒
TGM1 ELISA Kit脊髓性肌症蛋白Gemin6抗体角质转谷氨酰胺酶(TGM1)ELISA试剂盒
SQLE ELISA Kit磷酸化胶质纤维酸性蛋白抗体角鲨烯单加氧酶(SQLE)ELISA试剂盒
KERA ELISA Kit自主生长因子GFI1抗体角膜蛋白(KERA)ELISA试剂盒
CDSN ELISA KitG蛋白偶联受体109A抗体角化粒(CDSN)ELISA试剂盒
CNFN ELISA Kitγ-衔接蛋白相关蛋白1抗体角化蛋白(CNFN)ELISA试剂盒
DKC ELISA Kitγ-衔接蛋白相关蛋白2抗体角化不良蛋白(DKC)ELISA试剂盒
KRT9 ELISA Kitγ-衔接蛋白相关蛋白3抗体角蛋白9(KRT9)ELISA试剂盒
KRT81 ELISA Kit配子生成素抗体角蛋白81(KRT81)ELISA试剂盒

反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。