豚鼠耳炎诺卡菌PCR检测试剂盒说明书 返回列表页

组成及试剂配制:
1、豚鼠耳炎诺卡菌PCR检测试剂盒说明书酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。
【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得医疗器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用FAM通道。

SGLT1 ELISA Kit卵巢滤泡激素抗体钠/葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)ELISA试剂盒
ATP1β4 ELISA Kit羊抗人纤维蛋白原抗体钠/钾离子转运ATP酶β4肽(ATP1β4)ELISA试剂盒
NCKX2 ELISA KitFXYD离子转运调节因子7抗体钠/钾/钙交换因子2(NCKX2)ELISA试剂盒
NCKX1 ELISA Kit脂肪酸结合蛋白5抗体钠/钾/钙交换因子1(NCKX1)ELISA试剂盒
XYLB ELISA Kit脂氧素受体1抗体木酮糖酶同源物(XYLB)ELISA试剂盒
XYLT2 ELISA Kit半胱氨酸蛋白酶8相关蛋白2抗体木糖基转移酶Ⅱ(XYLT2)ELISA试剂盒
XYLT1 ELISA Kit叉头蛋白F1抗体木糖基转移酶Ⅰ(XYLT1)ELISA试剂盒
MELK ELISA Kit高嗜酸性粒细胞综合症相关蛋白FIP1L1抗体母系胚胎亮氨酸拉链蛋白激酶(MELK)ELISA试剂盒
MATN4 ELISA Kit叉头蛋白D4母系蛋白4(MATN4)ELISA试剂盒
MATN3 ELISA Kit磷酸化细丝蛋白A抗体母系蛋白3(MATN3)ELISA试剂盒
MATN2 ELISA Kit磷酸化细丝蛋白A抗体母系蛋白2(MATN2)ELISA试剂盒
MATN1 ELISA KitFMS样酪氨酸激酶3配体抗体母系蛋白1(MATN1)ELISA试剂盒
SPR ELISA KitF-box富含亮氨酸重复蛋白4抗体墨蝶呤还原酶(SPR)ELISA试剂盒
DNTT ELISA Kit免疫球蛋白E受体Fc ε RIγ抗体末端脱氧核糖核酸转移酶(DNTT)ELISA试剂盒
C5b-9 ELISA KitFcγ免疫球蛋白IgG结合蛋白抗体末端补体复合体C5b-9(C5b-9)ELISA试剂盒
MSN ELISA Kit磷酸肌醇结合蛋白1抗体膜突蛋白(MSN)ELISA试剂盒
FPN ELISA Kit磷酸化成纤维细胞生长因子受体3抗体膜铁转运蛋白(FPN)ELISA试剂盒
ANXA9 ELISA Kit叉头相关结构域包含蛋白1抗体膜联蛋白A9(ANXA9)ELISA试剂盒
ANXA8 ELISA Kit串珠状纤维结构蛋白1抗体膜联蛋白A8(ANXA8)ELISA试剂盒
ANXA7 ELISA Kit纤维调节蛋白抗体膜联蛋白A7(ANXA7)ELISA试剂盒
ANXA6 ELISA Kit磷酸化FANCD2抗体膜联蛋白A6(ANXA6)ELISA试剂盒
ANXA5 ELISA Kit范可尼贫血相关蛋白E抗体膜联蛋白A5(ANXA5)ELISA试剂盒
ANXA4 ELISA Kit范可尼贫血相关蛋白M抗体膜联蛋白A4(ANXA4)ELISA试剂盒
ANXA3 ELISA Kit软骨细胞Ezrin样蛋白抗体膜联蛋白A3(ANXA3)ELISA试剂盒
ANXA2 ELISA Kit慢性粒细胞白血病33抗体膜联蛋白A2(ANXA2)ELISA试剂盒
ANXA13 ELISA Kit白血病病毒C亚类受体蛋白FLVCR抗体膜联蛋白A13(ANXA13)ELISA试剂盒
ANXA11 ELISA Kit富含亮氨酸跨膜纤连蛋白1抗体膜联蛋白A11(ANXA11)ELISA试剂盒
ANXA10 ELISA Kit富含亮氨酸跨膜纤连蛋白2抗体膜联蛋白A10(ANXA10)ELISA试剂盒
ANXA1 ELISA Kit富含亮氨酸跨膜纤连蛋白3抗体膜联蛋白A1(ANXA1)ELISA试剂盒
MCP ELISA Kit牛纤维蛋白原抗体膜辅蛋白(MCP)ELISA试剂盒
WASF2 ELISA KitFAM172A蛋白抗体免疫缺陷伴血小板减少综合征蛋白家族成员2(WASF2)ELISA试剂盒
WASP ELISA Kit磷酸化粘着斑激酶抗体免疫缺陷伴血小板减少综合征蛋白(WASP)ELISA试剂盒
Tie1 ELISA Kit磷酸化粘着斑激酶抗体免疫球蛋白样EGF样域酪氨酸激酶1(Tie1)ELISA试剂盒
IGSF16 ELISA Kit磷酸化脆性组氨酸三联体抗体免疫球蛋白超家族成员16(IGSF16)ELISA试剂盒
Igλ ELISA Kit磷酸化FRA-1蛋白抗体免疫球蛋白λ(Igλ)ELISA试剂盒
Igκ ELISA Kit磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体免疫球蛋白κ(Igκ)ELISA试剂盒
IgJ ELISA Kit磷酸化碱性成纤维细胞生长因子受体1抗体免疫球蛋白J链(IgJ)ELISA试剂盒
IgG2 ELISA Kit磷酸化叉头蛋白家族抗体免疫球蛋白G2(IgG2)ELISA试剂盒
IgA2 ELISA Kit磷酸化叉头蛋白3A抗体免疫球蛋白A2(IgA2)ELISA试剂盒
IgA1 ELISA Kit磷酸化叉头蛋白3A抗体免疫球蛋白A1(IgA1)ELISA试剂盒
OCLN ELISA Kit磷酸化叉头蛋白3A抗体密封蛋白(OCLN)ELISA试剂盒
CTRB2 ELISA Kit磷酸化叉头蛋白家族1抗体糜蛋白酶原B2(CTRB2)ELISA试剂盒
CTRB1 ELISA Kit磷酸化叉头蛋白家族1抗体糜蛋白酶原B1(CTRB1)ELISA试剂盒
MAGT1 ELISA Kit叉头蛋白O4抗体镁离子转运蛋白1(MAGT1)ELISA试剂盒
ZG16B ELISA Kit磷酸化叉头蛋白4抗体酶原粒蛋白16同源物B(ZG16B)ELISA试剂盒
ANKRD1 ELISA KitFMS样酪氨酸激酶3锚定蛋白重复域蛋白1(ANKRD1)ELISA试剂盒
COTL1 ELISA Kit磷酸化FMS样酪氨酸激酶3毛状样蛋白1(COTL1)ELISA试剂盒
ATM ELISA Kit磷酸化FMS样酪氨酸激酶3毛细血管扩张性共济失调突变因子(ATM)ELISA试剂盒

反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。