西方蜜蜂微孢子虫PCR检测试剂盒品牌 返回列表页

组成及试剂配制:
1、西方蜜蜂微孢子虫PCR检测试剂盒品牌酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。
【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得医疗器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用FAM通道。

CHAD ELISA Kit大肠杆菌埃希杆菌O6抗体软骨粘附素(CHAD)ELISA试剂盒
GP39 ELISA Kit植物延展素-β软骨糖蛋白39(GP39)ELISA试剂盒
CHODL ELISA Kit内皮素-1抗体软骨凝集蛋白(CHODL)ELISA试剂盒
CRTAP ELISA Kit丝裂原活化蛋白激酶4抗体软骨关联蛋白(CRTAP)ELISA试剂盒
MFGE8 ELISA Kit埃兹蛋白抗体乳脂球表皮生长因子8(MFGE8)ELISA试剂盒
Maspin ELISA Kit细胞转录因子ELK1抗体丝抑蛋白(Maspin)ELISA试剂盒
BRCA2 ELISA Kit内皮素-1单克隆抗体癌易感蛋白2(BRCA2)ELISA试剂盒
BRCA1 ELISA Kit肠道病毒71型抗体癌易感蛋白1(BRCA1)ELISA试剂盒
BCAR1 ELISA Kit抗志贺毒素大肠杆菌O139抗体癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)ELISA试剂盒
LTF ELISA Kit表皮生长因子抗体乳铁传递蛋白(LTF)ELISA试剂盒
LCT ELISA Kit表皮生长因子抗体乳糖酶(LCT)ELISA试剂盒
LDHC ELISA Kit磷酸化真核翻译延长因子2抗体乳酸脱氢酶C(LDHC)ELISA试剂盒
LDHB ELISA Kit真核延伸因子激酶2抗体乳酸脱氢酶B(LDHB)ELISA试剂盒
CPT2 ELISA Kit磷酸化真核延伸因子激酶2抗体肉毒碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)ELISA试剂盒
CPT1B ELISA Kit真核启动因子2α抗体肉毒碱棕榈酰基转移酶1B(CPT1B)ELISA试剂盒
CPT1A ELISA Kit磷酸化一氧化氮合成酶3抗体肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)ELISA试剂盒
CT2 ELISA Kit真核翻译延长因子2抗体肉毒碱转运蛋白2(CT2)ELISA试剂盒
CRAT ELISA Kit癌基因ERG3抗体肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)ELISA试剂盒
CORT ELISA Kit猪源产肠毒素性大肠杆菌K88-K99抗体肉毒碱-O-甲基转移酶(CORT)ELISA试剂盒
FUS ELISA KitFAS凋亡抑制分子3抗体融合蛋白(FUS)ELISA试剂盒
SLC3A2 ELISA Kit纤维束1抗体溶质载体家族3成员2(SLC3A2)ELISA试剂盒
SLC39A6 ELISA Kit叉头蛋白P3抗体溶质载体家族39成员6(SLC39A6)ELISA试剂盒
SLC30A8 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受体I溶质载体家族30成员8(SLC30A8)ELISA试剂盒
SLC26A4 ELISA Kit叉头蛋白M1抗体溶质载体家族26成员4(SLC26A4)ELISA试剂盒
SLC1A5 ELISA Kit磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗体溶质载体家族1成员5(SLC1A5)ELISA试剂盒
SLC16A3 ELISA Kit磷酸化粘着斑激酶抗体溶质载体家族16成员3(SLC16A3)ELISA试剂盒
SLC16A1 ELISA Kit丝聚合蛋白/中间丝蛋白抗体溶质载体家族16成员1(SLC16A1)ELISA试剂盒
LPCAT4 ELISA Kit肺鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白抗体溶血卵磷脂酰基转移酶4(LPCAT4)ELISA试剂盒
LPCAT3 ELISA Kit凝血因子13抗体溶血卵磷脂酰基转移酶3(LPCAT3)ELISA试剂盒
LPCAT2 ELISA Kit滤泡树突细胞分泌蛋白抗体溶血卵磷脂酰基转移酶2(LPCAT2)ELISA试剂盒
LPCAT1 ELISA Kit纤维母细胞生长因子13抗体溶血卵磷脂酰基转移酶1(LPCAT1)ELISA试剂盒
LPEAT1 ELISA Kit骨骼肌肌球蛋白轻链2抗体溶血磷脂酰乙醇胺酰基转移酶1(LPEAT1)ELISA试剂盒

反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。