恙虫病东方体PCR检测试剂盒说明书 返回列表页

组成及试剂配制:
1、恙虫病东方体PCR检测试剂盒说明书酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。
【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得医疗器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用FAM通道。

Grb2 ELISA Kit磷酸化转录因子E2F-1抗体生长因子受体结合蛋白2(Grb2)ELISA试剂盒
Grb10 ELISA KitEFHC1蛋白抗体生长因子受体结合蛋白10(Grb10)ELISA试剂盒
SSTR5 ELISA KitEFHC2蛋白抗体生长抑素受体5(SSTR5)ELISA试剂盒
SSTR4 ELISA KitEFHD1蛋白抗体生长抑素受体4(SSTR4)ELISA试剂盒
SSTR3 ELISA Kit突触结合蛋白2抗体生长抑素受体3(SSTR3)ELISA试剂盒
SSTR2 ELISA Kit核苷酸焦磷酸酶2抗体生长抑素受体2(SSTR2)ELISA试剂盒
SSTR1 ELISA Kit长链烯脂酰辅酶A水化酶抗体生长抑素受体1(SSTR1)ELISA试剂盒
SST ELISA Kit神经元，肌肉特异性烯醇化酶抗体生长抑素(SST)ELISA试剂盒
GAS6 ELISA Kit内皮分化型G蛋白偶联受体3抗体生长停滞特异性蛋白6(GAS6)ELISA试剂盒
GADD45α ELISA Kit发育相关蛋白ERCC6L抗体生长停滞DNA损伤可诱导蛋白α(GADD45α)ELISA试剂盒
GROγ ELISA Kit猪源产肠毒素性大肠杆菌K99抗体生长调节致癌基因γ(GROγ)ELISA试剂盒
GROβ ELISA Kitα内磺肽抗体生长调节致癌基因β(GROβ)ELISA试剂盒
GHITM ELISA Kit磷酸化转录因子E2F-1抗体生长激素诱导跨膜蛋白(GHITM)ELISA试剂盒
GHR ELISA Kit表皮生长因子样激素受体1抗体生长激素受体(GHR)ELISA试剂盒
GHSR ELISA KitCREB结合蛋白p300抗体生长激素促分泌素受体(GHSR)ELISA试剂盒
GH2 ELISA KitEB病毒LMP-2A蛋白抗体生长激素2(GH2)ELISA试剂盒
GAP43 ELISA KitEB病毒核抗原抗体1抗体生长关联蛋白43(GAP43)ELISA试剂盒
GDF9 ELISA Kit磷酸化雌激素受体β抗体生长分化因子9(GDF9)ELISA试剂盒
GDF5 ELISA Kit磷酸化4E结合蛋白1抗体生长分化因子5(GDF5)ELISA试剂盒
GDF3 ELISA Kit磷酸化4E结合蛋白1,2,3抗体生长分化因子3(GDF3)ELISA试剂盒
GDF11 ELISA KitEpsin2B蛋白抗体生长分化因子11(GDF11)ELISA试剂盒
GDF1 ELISA Kit表皮生长因子抗体生长分化因子1(GDF1)ELISA试剂盒
BTD ELISA Kit表皮生长因子样蛋白8抗体生物素酰胺酶(BTD)ELISA试剂盒
SEMG2 ELISA KitE3泛素连接酶抗体生精蛋白Ⅱ(SEMG2)ELISA试剂盒
SEMG1 ELISA Kit小鼠抗表皮生长因子抗体生精蛋白Ⅰ(SEMG1)ELISA试剂盒
MYF6 ELISA Kit抗表皮生长因子抗体生肌因子6(MYF6)ELISA试剂盒
MYF5 ELISA Kit内皮细胞受体蛋白酪氨酸激酶A2+A3+A4抗体生肌因子5(MYF5)ELISA试剂盒

反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。