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| 货号 | GOY-01X0848 |
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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
公司细胞现货供应，质量有保证、*、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称 | 肝内胆管上皮细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X0848 |
商品介绍：
名称 肝内胆管上皮细胞 2.组织来源：肝脏组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 人肝内胆管上皮细胞分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。通过控制激素调控的分泌和吸收，在保持、调整和扩大胆小管的结构中发挥重要作用，肝内胆管上皮细胞在先天性和获得性免疫应答方面起着积极作用。肝内胆管上皮细胞约占肝细胞总数的5%，其在肝内胆道系统内形成复杂的网状管形结构。肝内胆管上皮细胞具有复杂的生理代谢功能，参与肝脏的代谢、排泌、免疫等生理过程，在肝脏疾病的发生发展过程中起一定的作用。研究表明，常见的肝内胆管病变例如原发性硬化性胆管炎、胆管癌等疾病，都是以肝内胆管上皮细胞为病变靶位，进而引起肝内胆管上皮损伤。因此，了解正常肝内胆管上皮细胞的生物学特征和病变肝内胆管上皮细胞的病理特征对研究肝内胆管病变的发病机制、诊断和治疗具有重要意义。 5.方法简介： ()实验室分离的人肝内胆管上皮细胞采用胶原酶灌注消化法后，再用胶原酶-DNA酶联合消化，接种至预先包被鼠尾胶原的培养瓶中，通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： ()实验室分离的人肝内胆管上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 包被条件鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-H042 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态上皮细胞样 传代特性可传2-3代 消化液0.25% 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
10 mg 5-Carboxyfluorescein succinimidyl ester Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人骨骼肌肌动蛋白α1(ACTα1)ELISA试剂盒
100mL Bis-Tris Propane,0.2M,pH7.0 Bis-Tris Propane,0.2M,pH7.0 常温保存 78-5000 pg/mL 人多种缺乏蛋白2(MCFD2)ELISA试剂盒
50ug 大片段DNA分子量标准 Large
肝内胆管上皮细胞1mg 肽S 转移 GST(Glutathione S-Transferase) -20℃保存
2 ug pYCP50-poly pYCP50-poly 低温运输，-20℃保存
玉米粉琼脂 Corn Meal Medium 250g
1瓶 NCI-N87 [N87]细胞株 NCI-N87 [N87] 低温运输和保存
2 ug PUMVC(Retrovirus packaging, 700) PUMVC(Retrovirus packaging, 700) 低温运输，-20℃保存
溴甲紫蛋白胨培养液 Bromocresol Purple Peptone Medium 250g
10g 次(亚)甲基兰 Methylene Blue 室温干燥保存
500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH8.0 Phosphate Buffer，0.2M, pH8.0 常温保存
2 ug pET-Trx pET-Trx 低温运输，-20℃保存
HHEX/HMPH 同源盒蛋白PRH抗体 规格: 0.1mlGDF15/MIC-1 生分化因子15/巨嗜细胞抑制因子1抗体 规格: 0.1ml
MYL6 肌球蛋白轻链6抗体 规格: 0.1ml
CLCN3/CLC-3 氯离子通道蛋白3抗体 规格: 0.2ml
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