原代人肾足突细胞 返回列表页

细胞简介：

人肾足突分离自肾组织；肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管，汇流入静脉，而是流入出球小动脉。在肾小球内，微血管受到高压，而加速了超滤作用（hyperfiltration）的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后，形成滤液，渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。足细胞（podocyte）即肾小囊脏层上皮细胞，它附着于肾小球基底膜（GBM）的外侧，连同GBM和毛细血管内皮一起构成了肾小球血液滤过屏障。足细胞特殊的解剖位置，使得其体内研究较为困难；又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞，体外培养的原代细胞不能增殖。足细胞呈星型多突状，胞体较大，由胞体伸出许多突起，又称足突（FP），呈指状交叉复盖于GBM外表面，并通过黏附分子和蛋白多糖分子与GBM相连。足细胞在正常情况下可以分泌GBM的主要组成成分，IV型胶原和纤维连接蛋白（FN）；在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解GBM作用的基质金属蛋白酶（MMPs）和组织蛋白酶，从而在GBM的代谢平衡中发挥重要作用。足细胞之间邻近的足突相互交替，形成了许多30-40nm的裂孔，孔上覆盖一层厚4-6nm的裂孔隔膜，即肾小球足突间裂孔隔膜。后者是血浆蛋白通过脉管系统的最后屏障，对于维持肾小球滤过屏障结构与功能完整性发挥关键作用。
方法简介：

公司实验室分离的人肾足突采用机械研磨过不同孔径不锈钢网筛结合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的人肾足突经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1) 将5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 从胸部解剖乳鼠，取出双肺置于预冷的PBS中，尽可能的除去结缔组织等，

3) 取肺边缘部分，剪碎，将组织块移入T25培养瓶中，倒置于细胞培养箱中，

4) 2h后，培养瓶中注入2 mL内皮培养基，小心将培养瓶正置于培养箱，确保组织块不会飘起来，

5) 每3d换液2mL，待细胞从组织块中爬出来后，隔2d换液，待细胞融合达到60-70%左右时，去除组织块，将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出T-25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜，以稳定细胞状态，然后换用新鲜培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落，再加入培养液终止消化，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中，滴加入培养液5ml混匀细胞，然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中；

3）放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜培养基继续培养。