原代人肾癌组织源细胞 返回列表页

细胞简介：

人肾癌组织源分离自癌组织；癌（cancer）是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类。相对应的，起源于间叶组织的恶性肿瘤统称为肉瘤。有少数恶性肿瘤不按上述原则命名，如肾母细胞瘤、恶性畸胎瘤等。一般人们所说的“癌症"习惯上泛指所有恶性肿瘤。癌症具有细胞分化和增殖异常、生长失去控制、浸润性和转移性等生物学特征，其发生是一个多因子、多步骤的复杂过程，分为致癌、促癌、演进三个过程，与吸烟、感染、职业暴露、环境污染、不合理膳食、遗传因素密切相关。癌细胞，是一种变异的细胞，是产生癌症的病源。癌细胞与正常细胞不同，有无限增殖、可转化和易转移三大特点，能够无限增殖并破坏正常的细胞组织。癌细胞除了分裂失控外（能进行多极分裂），还会局部侵入周围正常组织甚至经由体内循环系统或淋巴系统转移到身体其他部分。分恶性和良性两种。
方法简介：

公司实验室分离的癌组织源采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的人肾癌组织源经检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1) 将5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 从胸部解剖乳鼠，取出双肺置于预冷的PBS中，尽可能的除去结缔组织等，

3) 取肺边缘部分，剪碎，将组织块移入T25培养瓶中，倒置于细胞培养箱中，

4) 2h后，培养瓶中注入2 mL内皮培养基，小心将培养瓶正置于培养箱，确保组织块不会飘起来，

5) 每3d换液2mL，待细胞从组织块中爬出来后，隔2d换液，待细胞融合达到60-70%左右时，去除组织块，将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出T-25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜，以稳定细胞状态，然后换用新鲜培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落，再加入培养液终止消化，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中，滴加入培养液5ml混匀细胞，然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中；

3）放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜培养基继续培养。