原代大鼠前列腺上皮细胞 返回列表页

细胞简介：

大鼠前列腺上皮分离自前列腺组织；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官；前列腺是不成对的实质性器宫，由腺组织和肌组织构成。前列腺如栗子，底朝上，与膀胱相贴，尖朝下，抵泌尿生殖膈，前面贴耻骨联合，后面依直肠。前列腺腺体的中间有尿道穿过，扼守着尿道上口，所以，前列腺有问题时，排尿首先受影响。前列腺是机体非常少有的，具有内、外双重分泌功能的性分泌腺。作为外分泌腺，前列腺每天分泌前列腺液，是构成精液主要成分；作为内分泌腺，前列腺分泌的激素称为“前列腺素"。前列腺上皮细胞与前列腺的功能关系密切，上皮细胞的损伤是前列腺炎的主要病症，重度的前列腺炎患者的前列腺液内可检测到脱落的上皮细胞，这是上皮细胞损伤的标志。炎症发生时，与炎症相关的一些炎症因子可能发生变化。因此，体外培养前列腺上皮细胞是研究前列腺炎及前列腺上皮肉瘤等疾病的前提和基础。前列腺主要特征如下：①前列腺结构和功能活动均受雄性激素的调控；②基底细胞主要表达高分子量细胞角蛋白（CK-5、CK-14），基底上皮细胞可分化成管腔上皮细胞；③前列腺上皮细胞的培养为研究前列腺的许多重要特性以及化学和激素性致癌作用提供了机会。
方法简介：

公司实验室分离的大鼠前列腺上皮采用先中性dan白酶消化、后胶原酶-yi蛋白酶联合消化并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的大鼠前列腺上皮经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1) 将5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 从胸部解剖乳鼠，取出双肺置于预冷的PBS中，尽可能的除去结缔组织等，

3) 取肺边缘部分，剪碎，将组织块移入T25培养瓶中，倒置于细胞培养箱中，

4) 2h后，培养瓶中注入2 mL内皮培养基，小心将培养瓶正置于培养箱，确保组织块不会飘起来，

5) 每3d换液2mL，待细胞从组织块中爬出来后，隔2d换液，待细胞融合达到60-70%左右时，去除组织块，将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出T-25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜，以稳定细胞状态，然后换用新鲜培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落，再加入培养液终止消化，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中，滴加入培养液5ml混匀细胞，然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中；

3）放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜培养基继续培养。