原代大鼠神经少突胶质前体细胞 返回列表页

细胞简介：

大鼠神经少突胶质前体分离自脑皮层组织；大脑分左右两个半球，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。少突胶质细胞分布于中枢神经系统，在银浸染标本中，少突胶质细胞比星状胶质细胞小，其突起也较小而少，呈珠状，故被称为少突胶质细胞或寡突胶质细胞。少突胶质细胞（oligodendrocyte）是中枢神经系统（CNS）的成髓鞘神经胶质细胞，其发育要经历少突胶质细胞祖细胞、前少突胶质细胞祖细胞、未成熟和成熟少突胶质细胞等阶段。有学者将少突胶质细胞按其发育程度和形态分为三型。但是，细胞发育是一个连续的过程，其形态、表达产物和功能的演变没有严格的界限，因此，其分类是相对的。这三型分别为：Ⅰ型少突胶质细胞又称前O2A（pre-O2A progenitor cell）。细胞呈圆形，表面光滑，直径约3μm，体外混合培养时成簇生长在星形胶质表面，具有很强的分裂增殖潜力，表达神经节苷GM1、波形蛋白和多唾液酸—神经粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突胶质细胞胞体常有双极或三极突起，极少数为单极突起，直径约7μm，有一定的分裂增殖能力。体外培养时为双潜能细胞，既可分化为少突胶质细胞又可分化为Ⅱ型星形胶质，故又称为少突胶质细胞-Ⅱ型星形胶质祖细胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表达GM1和波形蛋白外还表达神经节苷GD3和GQ（淋巴杂交瘤株A2B5产生GQ的抗体），故常用A2B5抗体标记O2A。Ⅲ型少突胶质细胞不再具有分裂增殖能力，为分裂终期细胞。直径约10μm。根据其形成髓鞘的能力，又分为不成熟的和成熟的两类少突胶质细胞。不成熟的OL胞体常伸出4～5条较粗大突起，表面还残留有A2B5标记物，同时也表达O1-O4抗原，无形成髓鞘的能力。成熟的少突胶质细胞突起有如蜘蛛网，大量表达半乳糖脑苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有对轴突髓鞘化的能力。体外培养的少突胶质细胞前体细胞（简称少突胶质细胞前体细胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突胶质细胞，前两者具有增殖能力。
方法简介：

公司实验室分离的大鼠神经少突胶质采用yi蛋白酶消化、混合细胞营养缺失培养、摇床振荡结合差速贴壁法并通过专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶
质量检测：

公司实验室分离的大鼠神经少突胶质前体经A2B5免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1) 将5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 从胸部解剖乳鼠，取出双肺置于预冷的PBS中，尽可能的除去结缔组织等，

3) 取肺边缘部分，剪碎，将组织块移入T25培养瓶中，倒置于细胞培养箱中，

4) 2h后，培养瓶中注入2 mL内皮培养基，小心将培养瓶正置于培养箱，确保组织块不会飘起来，

5) 每3d换液2mL，待细胞从组织块中爬出来后，隔2d换液，待细胞融合达到60-70%左右时，去除组织块，将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出T-25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜，以稳定细胞状态，然后换用新鲜培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落，再加入培养液终止消化，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中，滴加入培养液5ml混匀细胞，然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中；

3）放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜培养基继续培养。