原代兔脉络膜微血管内皮细胞 返回列表页

原代兔脉络膜微血管内皮细胞

培养信息：包被条件PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%YI蛋白酶兔脉络膜微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

方法简介：

实验室分离的兔脉络膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白MEI混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：

实验室分离的兔脉络膜微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1. 取材的组织要尽快培养。如若不能及时培养，可将组织浸泡于培养液内，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果组织块很大，应切成1cm3以下的小块再低温保存，但时间不能超过24h。

2. 从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材，可用含500～1000u/ml的青BSS液漂洗5～10min，或用10%注射液冲洗浸泡10min再作培养。

3. 组织块不易贴壁，可预先在瓶壁涂薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。

4. 原代培养的1～2d内要特别注意观察是否有细菌、真菌、霉菌的污染，一旦发现，要及时清除。

1. 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶（或皿）中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

2. 消化培养法

组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和 非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状 变成 絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠 瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

3. 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

4. 器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。