分析原代细胞培养基的缓冲系统选择及pH变化问题

由于大多数原代细胞适宜的pH为7.0~7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不*相同，原代培养的细胞一般对pH变动耐受力差，无限细胞系耐受力强。因此，原代培养时，培养液中的缓冲系统就显得较为重要。一般的细胞培养基采用的都是平衡盐系统，但不同的培养基或是同一系列的培养基所用平衡盐系统不同，如199系列培养基、MEM系列培养基均有Hanks′系统的培养基及Earle′s系统的培养基。但是有些培养基不是上述常规的平衡盐系统，例如RPMI1640培养基、F12培养基。MEM低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统，该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力，选择合适的缓冲系统具有重要的作用。
在配制细胞培养液时，新配制的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH会向上浮动0.2左右。
原代细胞培养过程中pH值下降产生的原因较多。在细胞生长非常快时，pH值通常下降得很快，此时可以通过及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外，培养瓶盖拧得过紧、NaHCO3缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染等也能导致pH值通常下降得很快。这时，可以通过以下几种方法解决：
1) 按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，NaHCO3含量在2.0g/L到3.7g/L之间时对应的CO2浓度为5％到10％；
2) 改用不依赖CO2培养液；
3) 松开瓶盖1/4 圈。在培养液加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度；
4) 在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks′盐配制的培养液；
5) 原代细胞如果是污染造成的则丢弃培养物或用抗生素除菌。