小鼠肝星状细胞永生化细胞专用培养基操作步骤

小鼠肝星状细胞永生化细胞专用培养基操作步骤：

在完成培养基配制后，需进行无菌分装至培养瓶或培养皿中，避免长时间暴露于空气中。分装时建议在超净工作台内操作，使用0.22 μm滤膜过滤后的培养基可进一步降低污染风险。若需长期保存，可分装为50 mL/管，置于4℃避光储存，建议两周内使用完毕，以维持营养成分的稳定性。

接种永生化的小鼠肝星状细胞前，需先用预热的PBS轻柔洗涤细胞2-3次，以去除残留的血清或消化酶。采用0.25%（含EDTA）在37℃下消化30-60秒，加入含血清的培养基终止反应，离心后重悬细胞，调整密度至5×10⁴~1×10⁵ cells/mL。接种时注意均匀铺板，避免局部堆积影响细胞贴壁。

培养条件需严格控制在37℃、5% CO₂的恒温培养箱中，湿度维持在90%以上。换液建议在接种后24小时进行，此后每48-72小时更换一次新鲜培养基。若细胞密度超过80%，需及时传代，传代比例通常为1:2至1:3，以保持细胞良好的增殖状态。

为监测细胞状态，可定期在倒置显微镜下观察形态：永生化肝星状细胞应呈现梭形或多角形，胞质透亮，伪足明显。若出现颗粒增多或收缩圆化，可能提示培养环境异常。必要时可通过α-SMA免疫荧光染色或CCK-8增殖实验进一步验证细胞活性。

**注意事项**：

1. 避免反复冻融培养基，分装后标注配制日期；

2. 传代时消化时间不宜过长，防止细胞损伤；

3. 培养过程中出现污染需立即废弃并消毒操作区。

通过上述标准化操作，可确保永生化肝星状细胞的稳定生长，为后续肝纤维化机制研究或药物筛选提供可靠模型。